[发明专利]培养表面展示蜂毒肽蛋白片段重组枯草芽孢杆菌的培养基

说明书

本发明属于细菌培养基技术领域，具体涉及一种培养表面展示蜂毒肽蛋白片段重组枯草芽孢杆菌的培养基。所述培养表面展示蜂毒肽蛋白片段重组枯草芽孢杆菌的培养基，包括如下组分：K₂PO₄0.1‑2.0g/L，酵母浸粉0.1‑2.0g/L，酪蛋白水解肽0.1‑2.0g/L，溶剂为水，pH为7.1‑7.5。该培养基的培养效果好，能够显著提高获得的表面展示蜂毒肽蛋白片段重组枯草芽孢杆菌落数。

技术领域

本发明属于细菌培养基技术领域，具体涉及一种培养表面展示蜂毒肽蛋白片段重组枯草芽孢杆菌的培养基。

背景技术

随着国民经济的快速发展和生活水平的日益提高，人们对养殖环境及安全、健康的动物产品提出了更高、更新的要求。然而，近年来，频频曝光的动物食品安全事件，如“瘦肉精事件”、“三聚氰胺奶事件”等等，无一不对动物养殖业造成了沉重的打击，从而引发了严重的信任危机。中国作为世界第一动物养殖大国，动物产品出口在国民经济中举足轻重，但近年来欧洲、日本等一些国家以食品安全问题为壁垒，拒绝中国动物产品的部分进入，给我国经济造成了严重损失。“动物产品安全”问题，已成为制约中国养殖业科学健康和可持续发展的瓶颈。

动物微生态制剂是根据动物微生态学理论，利用动物体内正常的微生物成员及其代谢产物或生长促进物，经特殊的加工工艺制成的制剂。具有补充、调整或维持动物肠道内微生物平衡，达到防病、治病、促进健康和提高生产性能的目的(“动物微生物制剂的研究进展”，藤颖等，中国兽药杂志，2005年第39卷第11期，第43-46页，公开日2005年12月31日)。

目前，应用最广泛的微生态制剂为枯草芽孢杆菌制剂。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是一类好氧型革兰氏阳性菌，为Generally Recognized As Safe(GRAS)菌种之一，对人和动物均无致病性，可作为益生菌用于食品和药品领域。在营养缺乏或其他胁迫条件下，枯草芽孢杆菌能形成具有抗逆性的休眠体-芽孢。芽孢的形成是一系列芽孢衣壳蛋白基因，包括CotA、CotB、CotC、CotF、CotG等70余种蛋白基因按一定的时序调控表达而成，且大多数衣壳蛋白基因的缺失并不会引起枯草芽孢杆菌性状方面的明显变化。芽孢由皮层、芽孢衣壳和芽孢外壁构成，这三层结构的功能及特征使得枯草芽孢杆菌成为生命世界中抗逆性最强的一种结构，能够抵御恶劣的环境条件，如抗热、抗辐射及抗化学药物等方面，从而在自然环境条件下芽孢可存活几年甚至上千万年。

随着研究的不断深入，人们发现枯草芽孢杆菌可作为外源片段表达系统展示外源蛋白。随后人们研究和关注的热点逐渐趋向于以外层芽孢衣壳蛋白为分子载体，通过芽孢表面展示技术在枯草芽孢杆菌表面展示外源片段，成功展示外源片段的重组芽孢，成功展示外源段的重组芽孢不仅具有芽孢本身独特的抗逆性，而且还携带外源蛋白特有的生物活性。

Isticato等于2001年首次利用CotB作为载体蛋白，通过芽孢表面展示技术成功地将破伤风毒素(TTFC)C末端的459个氨基酸片段在枯草芽孢杆菌表面展示。另一芽孢外层衣壳蛋白基因CotC被作为融合载体，将TTFC和大肠杆菌的不耐热肠毒素B亚单位(LTB)分别展示于枯草芽孢杆菌表面。

现有疫苗，其保存均须存放于4℃中，且半衰期较短，这种条件的限制给疫苗的运输和储存带来不便，同时，增加疫苗运输和储存成本。尤其，像我国这种受运输及条件局限的发展中国家，即使针对某些疾病已生产出很好的疫苗，由于条件的限制疫苗不能得到广泛的应用，疫苗的质量难以得到保障，使用后不能达到理性的免疫效果。而以枯草芽孢杆菌为疫苗载体制备的重组活载体疫苗相对于传统疫苗而言具有生产成本低，便于保存和运输等优点，尤其适合在我国这样的发展中国家推广应用。