[发明专利]一种筛选促血管生成的间充质干细胞的方法

说明书

本发明提供一种以GREM1为标志物应用于筛选具有促进血管生成能力的间充质干细胞，本发明通过筛选GREM1浓度在5.37μg/ml以上的间充质干细胞，筛选出具有促进血管生成能力较强的间充质干细胞。本发明通过在氧浓度为1‑5％条件下和/或细胞倍增时间在25h以下的培养筛选手段，提高间充质干细胞对GREM1的表达，从而得到性能优良的促进血管生成的间充质干细胞，本发明提供的方法操作简单，成本低，不需要耗费细胞，减少浪费细胞成本，精准度高，省时省力，实践性强。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种筛选促血管生成的间充质干细胞的方法。

背景技术

心脑血管的相关缺血性疾病如今已成为临床上一类严重危害健康，降低患者生活质量，致死、致残率高的疾病，主要包括心肌梗塞、脑卒中、肢体性周围血管疾病等。它们共同的发生机理是病理或外力损伤导致动脉或静脉的血流急剧降低或中断阻塞，远端动脉血运和氧供差，使相应的组织或器官出现严重的持久性缺血缺氧损伤，导致组织或器官的功能丧失、发生坏死甚至危及生命。如《中国心血管病报告2016》报道，我国每年患心血管疾病的人已经上升约至2.9亿人，而且城市地区心血管病死亡率为264.84/10万人，其中心脏病死亡率为136.61/10万人、脑血管病死亡率为128.23/10万人，其中脑梗死、颅内出血、急性心肌梗死等心血管疾病的发病率不断上升。除此之外，自从2013年国际糖尿病联盟(IDF)公布的我国成为世界糖尿病第一大国以来，我国糖尿病患者因下肢血管闭塞、溃疡坏死常导致大非创伤性截肢的已占50％-60％，而且截肢后总死亡率依旧高达25％-50％。由此可见，血管性相关疾病已成为我国重大的公共卫生问题，防治心血管病刻不容缓。

理想条件下，治疗血管生成其目标主要是通过诱发其中的一种或多种过程，产生新生血管，参与微循坏的形成、血管旁路的发生和血管新生，从而恢复血流和氧代谢。这种血管新生主要有3种形式，即血管发生(vasculogenesis)、血管生成(angiogenesis)和动脉形成(arteriogenesis)。迄今为止，临床传统治疗血管相关疾病的方法主要包括内科药物治疗和外科的血流重建，都难以从机体本身诱导血管新生。再加上心血管疾病的患者以老年体弱者居多，常伴有多种心脑血管病变，多数无法承受手术搭桥等刺激，故以上传统治疗显然存在一定局限性，不能从根本上解决问题，难以取得令人浦意的疗效。因此临床迫切希望探索新的治疗手段改善心血管功能、甚至重建血运改善缺血。

目前，申请号为：201610321976.8，发明名称为“PDGFR-p作为促进血管生成的间充质干细胞亚群的标志物的应用”的专利公开：PDGFR-p在骨髓来源的MSCs及脂肪来源的MSCs都有很高的表达量，如PDGFR-p在胎盘来源的MSCs表面表达量有25％左右，而且随传代培养表达量发生变化。而且他们通过体外、体内两方面的实验寻找PDGFR-p阳性表达的MSCs的作用和功能；体外实验发现PDGFR-p阳性的MSCs表达血管生成相关因子水平大幅提高；体内实验通过将PDGFR-p阳性表达的MSCs和PDGFR-p阴性表达的MSCs应用于小鼠皮肤伤口模型，发现PDGFR-p阳性表达的MSCs血管生成能力明显增强，细胞在伤口中的存活性和迁徙能力都比较强，促进伤口愈合效果很好。因此认为PDGFR-p可作为筛选促血管生成的间充质干细胞标志物。“PDGFR-p作为促进血管生成的间充质干细胞亚群的标志物的应用”：虽然公开了PDGFR-p可作为筛选促进血管生成的间充质干细胞亚群的标志物，但是PDGFR-p作为一种细胞膜受体，要对这类膜受体进行细胞筛选，均采用免疫磁珠的方法；但是免疫磁珠分选的方法费用昂贵，同时PDGFR-p在大多数间充质千细胞表达仅占25％作用，要在分选前对细胞进行PDGFR-p的表达进行重复评估和鉴定，只能采用流式细胞分析或者qRT-PCR或者westernblot等技术对其的表达进行鉴定，这类的方法共同点均是需要消化一定数量的细胞，才能进行检测。所以所采用的设备需求相对较多，实验成本相对较高。其他的则是通过基因编辑技术或者生物医学工程构建特异性的可以促进血管生成的间充质干细胞技术，而不涉及相关可评估间充质干细胞具有促血管生成的的任何生物标记物。