[发明专利]操纵子、其载体及其应用

说明书

本发明公开了操纵子、其载体及其应用，其中，所述操纵子序列至少包括，3’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游201～257bp中任一碱基、5’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游308bp～345bp中任一碱基。本发明操纵子被诱导剂诱导后，蛋白表达活性显著高于传统Ptac的诱导表达活性，是一种超高效操纵子。本发明操纵子能够用于原核生物内源或外源蛋白的高效表达。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及操纵子、其载体及其应用。

背景技术

启动子是一段控制着基因转录起始的关键DNA序列，对基因的表达具有重要的调控作用，启动子主要控制基因的转录水平，有研究通过大量的分析证明在控制基因表达的各种序列区域中，启动子区域的影响力超过45％，而操纵子调控着整个启动子的表达。因此，筛选高活性的操纵子对基因表达的研究具有重要意义。

目前现有技术存在蛋白表达效率低，可用遗传工具少等问题，而开发可用于外源蛋白表达的高效启动子是解决这些问题的重要途径。近年来常用的诱导型启动子有tac启动子(Ptac)、阿拉伯糖启动子、麦芽糖诱导启动子、丙酸诱导启动子、温度敏感启动子等，但是这些启动子的表达活力很有限，且可选择的种类少。鉴于诱导型启动子在蛋白表达和代谢工程研究中的重要意义，非常有必要开发一种谷氨酸棒杆菌的高活力的诱导型启动子。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供操纵子。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：操纵子，其中：所述操纵子序列至少包括，3’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游201～257bp中任一碱基、5’端位于谷氨酸棒杆菌SEQ ID NO：6基因编码序列ATG上游308bp～345bp中任一碱基。

作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供载体。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：载体，其中：所述载体装载所述的操纵子。

作为本发明所述的载体的一种优选方案：所述载体包括蛋白表达载体p19-0-ZDA。

作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供所述的操纵子在蛋白表达中的应用。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：所述的操纵子在蛋白表达中的应用。

作为本发明所述的操纵子在蛋白表达中的应用的一种优选方案：所述操纵子用于谷氨酸棒杆菌内源或外源蛋白的表达。

作为本发明所述的操纵子在蛋白表达中的应用的一种优选方案：所述外源蛋白包括人胃内因子蛋白GIF、HIS-SUMO-N端脑钠肽前体。

作为本发明所述的操纵子在蛋白表达中的应用的一种优选方案：所述操纵子具有诱导活性。

作为本发明所述的操纵子在蛋白表达中的应用的一种优选方案：所述操纵子能够被包括苯甲醇、苯甲醛、苯甲酸、儿茶酚的任一种或几种诱导。

作为本发明所述的操纵子在蛋白表达中的应用的一种优选方案：所述苯甲醇的诱导浓度范围为1mM～50mM。

作为本发明所述的操纵子在蛋白表达中的应用的一种优选方案：所述苯甲醇的诱导浓度为10mM。