[发明专利]一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的CAR-T细胞的构建及其应用

说明书

本发明涉及肿瘤免疫领域，具体涉及一种靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的CAR‑T细胞的构建及其应用。本发明的CAR‑T细胞是通过将靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的嵌合抗原受体(CAR)转染至T细胞构建而成，其中靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的嵌合型抗原受体由CD8抗原的前导肽、抗间皮素单链抗体、铰链区、跨膜区、胞内信号域和抗PD‑L1抗体分泌区依次连接组成。本发明的CAR‑T细胞的间皮素SS1P scFv可以特异性的与表达间皮素糖蛋白的肿瘤细胞结合，促进抗肿瘤相关细胞因子的分泌，从而对这类肿瘤细胞产生杀伤效应；另外，本发明的CAR‑T细胞还能分泌PD‑L1抗体，特异性的与肿瘤细胞表达产生的PD‑L1相结合，阻断PD‑L1/PD‑1信号对T细胞活性的抑制效应，有利于CAR‑T长时间对肿瘤细胞生长产生有效的抑制。

技术领域

本发明涉及肿瘤免疫领域，具体涉及一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的CAR-T细胞的构建及其应用。

背景技术

间皮素(mesothelin，MSLN)是一种通过磷脂酰肌醇区(GPI)锚定在细胞质膜上的糖蛋白，其在实质性器官如心脏、肾脏、肝脏中几乎不表达，在正常情况下，其主要表达于腹膜、胸腹腔和心包上的间皮细胞中，而在上气管、卵巢、扁桃体和输卵管等上皮细胞表面低表达。最近对于实体瘤的研究发现，间皮素在肺癌、胃癌、食管癌胸腺癌中都处于过表达，从而改变细胞的生物学特征。间皮素在细胞内主要是通过两条途径来发挥调节细胞功能的作用，一是通过其GPI结构域直接激活细胞内信号通路，二是与其受体CA125/MUC16相互作用。当细胞内间皮素处于过表达的状态时，就会激活NFκB、MAPK和PI3K细胞内信号通路，促进细胞增殖，抵抗细胞凋亡。而且，通过对卵巢癌细胞系的研究发现，间皮素还可以通过与CA125相互作用而导致异常的细胞粘附，促进癌症细胞的转移。此外，通过间皮素基因敲除小鼠的研究发现，间皮素基因的缺失，并未影响小鼠的生长发育过程。因此，目前普遍认为。间皮素的表达与否，与人类的生长发育之间不存在关联性，但其高表达与肿瘤细胞的非锚定增殖、抗失巢凋亡、细胞耐药等密切相关，是癌症靶向治疗的理想靶点。

程序性死亡受体配体(PD-L1)广泛表达于非造血细胞和肿瘤细胞表面，在肿瘤微环境中发挥着关键作用，其作为一种负性因子与PD-1相互作用时，不仅阻断体内效应细胞活化第一、二信号，阻止效应性细胞活化增殖、并发挥其抗肿瘤效应，而且也能抑制过继转输的免疫效应性细胞的抗肿瘤效应，此外，还能辅助调节性细胞发挥抑制性功能，甚至诱导辅助性细胞向调节性细胞转化，严重影响实体瘤的免疫治疗。最新研究表明，阻断PD-L1/PD-1信号可削弱调节性细胞对效应性细胞的增殖抑制，促进抗肿瘤相关细胞因子的分泌，进而对肿瘤细胞生长产生有效的抑制，延长小鼠生存时间。