[发明专利]抑制茶树组培中外植体氧化褐变和内生菌污染的培养方法

权利要求书

1.抑制茶树组培中外植体氧化褐变和内生菌污染的培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤1、获取操作对象

（1.1）、将新鲜茶树种子用自来水洗涤，除去外种皮后，浸泡一夜，使用过滤器，“漂浮种子”和“沉降种子”被分开，选用“沉降种子”为培养料；

（1.2）、将（1.1）选取的种子转移到无菌的500毫升锥形烧瓶中，用水洗涤两次，在4%多菌灵浸泡过夜；次日用无菌蒸馏水冲洗多菌灵处理的种子，再用70%乙醇消毒3分钟，然后用0.1%的氯化汞消毒4分钟，再用无菌蒸馏水漂洗三次，获得无菌种子；

（1.3）、将（1.2）获得的种子用Whatman 1号滤纸上吸干水干燥，用无菌刀和镊子在无菌条件下除去种子外衣，然后将种子置于1/2强度的MS培养基上，待其发芽长成试管苗；

（1.4）、切取（1.3）获得的试管苗、并将嫩枝分段，在含有2 mg/L 6-苄氨基嘌呤（BAP）和0.1 mg/L吲哚-3-丁酸（IBA）的1/2强度MS培养基扩大繁殖，待用；

步骤2、外植体培养

将步骤1获得的操作对象放入B5培养基上培养12-24天，所述培养基中还添加如下化合物：经0.2um过滤膜灭菌的2-3.5uM 2-氨基吲哚-2-膦酸（AIP）、2 mg/L 6-苄氨基嘌呤（BAP）、1 mg/L噻哒隆（TDZ）、10%椰子水和300 mg/L L-谷氨酰胺、150 mg/L的泰门汀和30mg/L庆大霉素。