[发明专利]一种前列腺癌原位PDX模型构建方法

说明书

本发明公开了一种前列腺癌原位PDX模型构建方法，包括以下步骤：组织块的预处理，小鼠前列腺腹侧叶接种和小鼠常规饲养与观察，小鼠前列腺腹侧叶贴近下腹部，因此可通过人肉眼来观察成瘤情况。本发明操作简单，无需购买昂贵的试剂耗材将组织分离成单个的细胞，由于是组织块，因而依旧保留了肿瘤组织原有的微环境，依附小鼠生殖系统生长，更好的模拟临床实际情况，另外贴近体表，便于人肉眼观察和操作。

技术领域

本发明涉及癌症研究和治疗技术领域，尤其涉及一种前列腺癌原位PDX模型构建方法。

背景技术

前列腺癌（Prostate cancer, PCa）是美国男性发病率最高的恶性肿瘤。在我国2012年的肿瘤患者统计中，前列腺癌的发病率也位列于男性恶性肿瘤发病率的第6位，而且近年来，发病率也有逐年上升的趋势。据统计，近20年来，我国前列腺癌的发病率增长超过10倍。

前列腺癌是一种激素依赖性癌症，尽管对于晚期患者采用了许多新疗法，但由于部分患者内分泌治疗耐药性的发展，使得总体生存率仍然相对较短。这些机制包括雄激素受体（AR）轴的干扰和雄激素生物合成的抑制。来源于前列腺上皮层的恶性肿瘤细胞，包括分泌腔、基底细胞和罕见的神经内分泌细胞，给PCa带来了高度的异质性。哪种类型的上皮细胞代表前列腺癌的起源，是管腔干细胞或者基底干细胞或者两者都是，这一点仍不清楚，但可想而知其中的机制非常复杂。

为了克服PCa研究和治疗中众所周知的限制和困难，前列腺癌人源肿瘤异种移植模型（Patient-derived xenografting, PDX）应运而生。

PDX模型是将来源于肿瘤患者的组织块、循环肿瘤细胞及原代细胞植入免疫缺陷鼠的体内形成的移植瘤模型。PDX模型依靠动物提供的环境生长，保留人原代肿瘤微环境和基本生物学特性。一个PDX模型对应一个病人，能够很好地反映不同个体间肿瘤的差异性。PDX相较于传统模型更能够反应临床病人的实际情况。

通过将人体前列腺癌组织或原代细胞原位或异位接种至免疫缺陷小鼠（如Balb/C-nu/nu、NOD-SCID、NOG\NSG、NPG等）体内建立人前列腺癌PDX模型。接种后成瘤周期需要2-12个月，平均成瘤率23-75%，成瘤率与肿瘤侵袭性关系密切。前列腺癌PDX模型的构建方法常见的有皮下接种、原位接种和肾包膜接种，其中肾包膜由于血管丰富接种成瘤率最高（高度免疫缺陷小鼠如NOG、NPG，移植成功率能够达到90%左右）。但是肾包膜接种手术操作难度大，且不易观察。另外，由于前列腺癌是雄激素依赖性的肿瘤，因而在构建PDX模型中往往还会考虑埋置雄激素药片以促进成瘤和更好的模拟临床情况。常规前列腺癌原位PDX模型是通过手术将比较大的肿瘤块（2×2×2mm3）接种在免疫缺陷小鼠前列腺腹侧部，由于肿瘤块较大，前列腺组织较薄，肿瘤块接种操作难度比较大，瘤块内部细胞比较难获得营养。本发明改良了人前列腺癌原位PDX模型的操作方法，将肿瘤微组织块通过经皮注射多点接种至雄性免疫缺陷小鼠前列腺侧叶内，保留了肿瘤组织的微环境和异质性，肿瘤微瘤块存活率好，操作简单，有望在前列腺癌个性化精准医疗、抗癌新药临床前药筛和前列腺癌研究肿瘤得到广泛应用。

发明内容

本发明为了解决现有技术的上述不足，提出了一种前列腺癌原位PDX模型构建方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种前列腺癌原位PDX模型构建方法，包括以下步骤：1）肿瘤样本采集：手术中切取肿瘤边缘生长比较旺盛、无溃疡坏死的肿瘤组织，迅速装入含有组织保存液的离心管中，离心管装入冰包低温运输至实验室。