[发明专利]一种高纯度核苷酸的精制方法

说明书

本发明提供一种高纯度核苷酸的精制方法，至少包括以下步骤：(1)一次精制：向反应器中加入核苷酸粗品、溶剂，调节pH7.0‑9.0，升温至50‑70℃，加入脱色剂，保温反应0.5‑1h，过滤，然后将滤液降温至室温，得到核苷酸一次精制溶液；(2)二次精制：将步骤(1)中得到的核苷酸一次精制溶液经过强碱性阴离子交换树脂柱处理；然后用顶洗液洗脱，收集二次精制溶液；(3)结晶：向步骤(2)中得到的二次精制溶液中加入盐析剂、有机溶剂，进行结晶，过滤，淋洗，干燥，得到高纯度核苷酸；其得到的核苷酸纯度高、收率高、杂质少。

技术领域

本发明涉及产品精制技术领域，具体地，本发明涉及一种高纯度核苷酸的精制方法。

背景技术

鸟苷酸或腺苷酸、胞苷酸、尿苷酸、肌苷酸可以通过发酵、RNA酶解和化学合成等方法制得。它们可应用于医药、营养强化剂和食品添加剂等领域，特别是鸟苷酸二钠和肌苷酸二钠已广泛应用于食品鲜味剂，用量也较大。鸟苷酸或腺苷酸、胞苷酸、尿苷酸、肌苷酸等核苷酸的生产技术已较成熟，但在产品质量方面尚存色泽、纯度等缺陷。特别是发酵或RNA酶解获得的产品，往往含有色素等较难去除的杂质而影响产品的质量。

关于发酵或酶法生产核苷酸分离纯化方法，专利号为CN101993466公开了一种5’-鸟苷酸二钠的制备方法，通过用强碱阴离子交换树脂分离纯化的方法，其目的是应用树脂将鸟苷酸二钠与鸟苷或鸟苷衍生物分开，离子交换吸附，然后解析。专利号为CN1177859公开了用阴离子交换树脂从核糖核酸酶解液中分离核苷酸的方法，其应用树脂将4种核苷酸分离纯化，通过交换吸附解析，获得单一核苷酸。专利号CN105348347公开了5’-鸟苷酸二钠的精制方法，其方法比较繁琐，应用30-35％盐酸和0.1-1.0mol/L氯化钠混合液洗脱，GMP在酸性条件下不稳定；在这样高浓度盐酸下，鸟苷酸二钠会分解成鸟苷和鸟嘌呤等，另外改用0.1-1.0mol/L氯化钠洗脱，色素也将5’-鸟苷酸二钠同时洗脱下来，不能达到去除色素的目的。

色素的去除一般可采用活性炭脱色，以及大孔树脂、脱色树脂等方法。但是对于发酵或RNA酶解获得的5’-鸟苷酸二钠产品，其它种种方法都不能获得理想效果，例如采用常用活性炭必须在酸性条件下脱色，而5’-鸟苷酸二钠在pH3-4 左右会形成凝胶状物质，而无法操作。

因此，针对上述问题，本发明提供一种高纯度核苷酸的精制方法，其得到的核苷酸纯度高、收率高、杂质少。

发明内容

本发明针对目前生产工艺中存在的问题提出以下解决方案。从发酵法获得核苷酸主要存在色素、核苷等杂质。从RNA降解获得核苷酸主要存在色素、其他核苷酸等杂质。

针对上述问题，本发明提供一种高纯度核苷酸的精制方法，至少包括以下步骤：

(1)一次精制：向反应器中加入核苷酸粗品、溶剂，调节pH7.0-9.0，升温至50-70℃，加入脱色剂，保温反应0.5-1h，过滤，然后将滤液降温至室温，得到核苷酸一次精制溶液；

(2)二次精制：将步骤(1)中得到的核苷酸一次精制溶液经过强碱性阴离子交换树脂柱处理；然后用顶洗液洗脱，收集二次精制溶液；

(3)结晶：向步骤(2)中得到的二次精制溶液中加入盐析剂、有机溶剂，进行结晶，过滤，淋洗，干燥，得到高纯度核苷酸。

在一种实施方式中，所述步骤(1)中脱色剂包括医用活性炭、活性炭301、活性炭303中一种。

在一种实施方式中，所述步骤(2)中强碱性阴离子交换树脂柱装填的强碱性阴离子交换树脂为201强碱性阴离子交换树脂、Amberlite IRA-400阴离子交换树脂、DIAIONHP20阴离子交换树脂、PA312阴离子交换树脂、胍基强碱阴离子交换树脂。

在一种实施方式中，所述步骤(2)中核苷酸一次精制溶液与所述强碱性阴离子交换树脂的配比为(0.3-2)：1；核苷酸质量以Kg计，阳离子交换树脂体积以L计。