[发明专利]一种多糖蛋白结合疫苗及其鉴别方法

说明书

本发明涉及一种多糖蛋白结合物及其鉴别方法，以及根据上述多糖蛋白结合物制备的多糖蛋白结合疫苗及其鉴别方法。本发明的速率散射比浊法是一种基于免疫化学方法建立的技术手段，速率散射比浊法可测量悬浮于小杯中抗原抗体复合物聚集体颗粒所造成的散射光强度变化，并在几十秒内得出反应速率值。抗原抗体反应形成复合物聚集体颗粒，因抗原和/或抗体浓度的不同而速率不同。该法特异性强，灵敏度高，节约检测时间，且抗原抗体直接接触，有利于低浓度样品检测，可用于疫苗生产过程中原液和/或半成品和/或成品的鉴别。

技术领域

本发明涉及医疗领域，具体的涉及疫苗及疫苗的鉴别，尤其是一种免疫原性多糖蛋白结合物及其鉴别方法以及一种多糖蛋白结合疫苗及其鉴别方法。具体的涉及一种多糖蛋白结合疫苗及其鉴别方法。

背景技术

疫苗接种是预防感染的有效措施，疫苗质量控制尤为重要。鉴别试验是利用药物的分子结构所表现的特殊化学行为(如进行化学反应、测定药物的理化常数等)或光谱、色谱、生物学等特征，来判断药品的真伪。药物的鉴别在药物质量检验工作中属首项工作。只有药物被鉴别无误、证实被分析药物组分正确后，才有必要进行检查和含量测定等分析工作。在结合疫苗中，多糖与蛋白载体共价偶联形成结合疫苗，可使多糖由T细胞非依赖型抗原转化成T细胞依赖性抗原，增强多糖的免疫原性，产生足够的保护力。多糖和蛋白载体的鉴别是保证多糖蛋白结合疫苗真伪和质量的一项重要质控指标。由于在多糖蛋白结合疫苗中一般存在多种多糖和蛋白载体成分，鉴别试验在检测多糖蛋白结合疫苗的质量稳定性，疫苗多糖组分和蛋白组分的正确性过程中起到了至关重要的作用。除此之外，利用特异性免疫反应对多糖蛋白结合疫苗进行鉴别试验，还可以间接证明疫苗中各有效成分是否具有相应的抗原性，疫苗制备的工艺过程是否破坏了各成分的抗原性。

欧洲药典《European Pharmacopoeia 8.0》、WHO规程《WHO Technical ReportSeries》、《中华人民共和国药典》(2015年版三部)均要求对多糖蛋白结合疫苗原液和成品进行鉴别，如：A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗、A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗、b型流感嗜血杆菌结合疫苗、肺炎球菌多糖结合疫苗。《EuropeanPharmacopoeia 8.0》中C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗、b型流感嗜血杆菌结合疫苗、肺炎球菌多糖结合疫苗生产过程中原液及成品中多糖的鉴别方法为免疫学方法和核磁共振法，生产过程中原液及成品中载体蛋白的鉴别方法为免疫学方法；《WHO Technical ReportSeries》中A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗、b型流感嗜血杆菌结合疫苗、肺炎球菌多糖结合疫苗中推荐使用免疫学方法和核磁共振波谱；《中华人民共和国药典》(2015年版三部)中收载的A群C群脑膜炎球菌结合疫苗、b型流感嗜血杆菌结合疫苗生产过程中原液及成品的鉴别方法为免疫学方法。其中《中华人民共和国药典》(2015年版三部)中常用的免疫学方法为免疫双扩散法，该法是在琼脂板上打孔，将抗原抗体加入相应孔中，待其自由扩散后，抗原抗体形成可见的沉淀线。其中抗原抗体自由扩散的速度受分子量影响，分子量小者，扩散快，反之较慢。自由扩散这一性质使得该法耗时长，且对于分子量较大的多糖蛋白结合物而言免疫凝胶双扩散法较难形成明显的沉淀线，导致结合疫苗鉴别困难。