[发明专利]一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法

说明书

本发明公开了一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法，包括体外抗肿瘤检测方法和体内抗肿瘤活性检测方法，通过体外抗肿瘤检测方法计算霍山石斛茎精制多糖对肿瘤细胞的抑制率，根据不同浓度抑制率绘制量效曲线，计算出对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC₅₀，通过体内抗肿瘤活性检测方法霍山石斛精制多糖对C57BL/6J小鼠体内移植性小鼠肺癌LLC肿瘤体内生长抑制作用，体外实验表明霍山石斛精制多糖对体外抗肿瘤作用存在明显的剂量效应，体内活性实验表明霍山石斛精制多糖具有良好的抗肿瘤活性，且具有较好的量效关系，能显著性抑制小鼠肺癌移植瘤的生长，具有明显的体内抗肿瘤作用，两种实验方法相结合使得霍山石斛精制多糖对抗肿瘤活性的检测更加准确。

技术领域

本发明属于植物药物技术要域，具体涉及一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活 性的检测方法。

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人类健康和生命安全的一类重大疾病，随着生态环境 遭受破坏，人口老龄化如剧、人类不健康的生活方式等问题凸显，肿瘤发病率 及死亡率持续上升，目前已成为人类的主要死因，严重危害人类健康和生命安 全。世界卫生组织国际癌症研究所在GloboCan发布的数据显示，2012年全球 新增癌症病例数14707万例，死亡820万例。其中中国2012年的新增癌症病例 数为306.5万例，死亡220.6万例，预计今后20年新发病例数将增加约70％， 至2025年全球癌症新发病例数将达到1900万例。

目前，癌症在世界上仍是一种难治之症，常见的癌症的治疗方法以手术治 疗、放射治疗和化学治疗为主，具有毒副作用大、疗效不确定、选择性差、靶 向性不强以及癌细胞耐药等许多问题，治疗的效果受到了很大的限制，因此开 发长效、缓释和靶向性抗肿瘤药物是当今研究的重点。中药是我国的医学宝库， 中药往往具有多靶点、低毒性、作用持久等特点，中药单独或辅助西药治疗肿 瘤在提高机体免疫力、延长生存期、降低复发转移率及减轻副作用等方面有着 积极的意义。因此以传统中药为来源研发新型天然抗肿瘤药物，是抗肿瘤药物 研究的一个重点方向。

霍山石斛为兰科石科国多年生草本植物，主产于中国安徽西南部大别山区 的霍山县，又名皇帝草，足见之珍贵。其根茎不仅可入药，还是一种名贵的滋 补品，具有生津养胃、明目护肝以及抗肿瘤等功效。明代李时珍在《本草纲目》 中记载:“石斛甘平无毒。主治伤中，除痹下气，补五脏虚劳贏瘦，强阴益精， 久服厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，逐皮肤邪热痱气，脚膝疼冷痹弱。 定志除惊，轻身延年，益气除热，治男子夏脚软弱，健阳。逐皮肤风痹，骨中 久冷，补肾益力，壮筋骨，暖水脏，益智清气，治发热自汗。”因此，霍山石 斛对人体有着极其重要的保健功效。药理学研究发现，霍山有解中含有多糖， 生物碱、酚类和各种微量元素，其中多糖的活性十分明显。多糖有一定的抗肿 瘤活性，目前，有关多糖生物活性的检测手段主要是整体水平和原代细水平检 测。这种检测方法方式较为单一，并且不能够精确反应出多糖对肿瘤抑制效果 之间的关系。

发明内容

本发明的目的是提供一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法，用来 解决现有技术检测方式单一，不能够反应多糖与肿瘤抑制效果之间的关系。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下，

一种霍山石斛精制多糖抗肿瘤活性的检测方法，该检测方法包括体外抗肿 瘤检测方法和体内抗肿瘤活性检测方法，其中，

(1)体外抗肿瘤检测方法步骤为：

①把肿瘤细胞接种到新鲜培养基中进行培养，培养至对数生长期，并制成 细胞悬液，接种到细胞培养板上；

②配置不同浓度的霍山石斛精制多糖，肿瘤细胞贴壁生长后，弃去旧培养 基，设置对照组，在每组加入不同浓度的霍山石斛精制多糖，分别在培养箱内 培养12h、24h、48h和72h；

③取出细胞培养板，加入MTT溶液，遮光孵育；