[发明专利]一种百合种球组织的保存方法

权利要求书

1.一种百合种球组织的保存方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)预培养：将百合种球清洗干净，消毒，裹上一层包衣后，置于冰桶中保存0.5～4小时；

2)脱水：将百合种球组织转移至冷冻管中，室温下用玻璃化溶液处理20～35min，再用PVS2原液在0℃条件下处理10～50min；

3)液氮保存：移去PVS2原液，用蜡块包封百合种球组织，密封在冷冻管内，直接投入液氮中冷冻保存；

4)化冻：取出液氮中封存的百合种球组织，迅速化冻，除去表面石蜡层，用洗涤液洗涤2～3次，进行恢复培养。

2.如权利要求1所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：步骤(1)所述的包衣材料为云母、食品级明胶和水溶性壳聚糖按10：(5～8)：3的混合物。

3.如权利要求1所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：步骤(2)的玻璃化溶液是浓度为60％的PVS2溶液。

4.如权利要求1或3所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：所述的玻璃化溶液为0.4mol/L蔗糖液体培养基与PVS2溶液按4：6所得混合液。

5.如权利要求4所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：所述的PVS2溶液组成为30％甘油、15％乙二醇、15％DMSO、3％的蔗糖、3％淀粉和0.4mol/L抗冻糖蛋白。

6.如权利要求1所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：所述的化冻是将百合种球组织从液氮中取出，先水浴解冻，然后去除玻璃化溶液后用洗涤液洗涤，最后转入恢复培养基中恢复培养。

7.如权利要求6所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：所述的水浴解冻是在30～40℃的水浴中解冻60～120s。

8.如权利要求6所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：所述的洗涤液为含有1.0～1.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L KNO₃的MS培养液。

9.如权利要求1或6所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：所述的恢复培养是将步骤(4)所得百合种球组织置于固体培养基中，暗培养1周，光培养4周后，置于土壤或基质中种植。

10.如权利要求1～9任一项所述的百合种球组织的保存方法，其特征在于：所述的百合种球组织，在液氮中封存的时间为1～365天。