[发明专利]一种用于动物组织病料核酸的快速提取方法

说明书

本发明公开了一种用于动物组织病料核酸的快速提取方法，涉及核酸提取技术领域。包括(1)配制裂解液；(2)组织裂解；(3)初步分离；(4)核酸沉淀；(5)核酸提纯。本发明通过改进核酸提取过程中使用的裂解液，大大简化了核酸提取的方法，操作简便安全，成本低廉，解决了现有核酸提取方法不适应室外环境，检测时间较长以及所用提取试剂含有有毒有害物质存在安全隐患的问题；通过调整裂解液的PH值可实现分别对DNA和RNA的提取，解决了现有试剂盒等方法只能提取单一核酸的问题。

技术领域

本发明属于核酸提取技术领域，特别是涉及一种用于动物组织病料核酸的快速提取方法。

背景技术

核酸(包括DNA和RNA)提取纯化是分子生物学中的一项基本操作，分子生物学技术以其快速、敏感、特异等优点而在动物疫病的检测，确诊工作中得到越来越多的应用，目前核酸的提取包括酚抽提法、盐洗法、TRIZOL法、磁珠法以及试剂盒法等，但传统的检测方法对仪器和环境要求较高，无法满足室外作业，为进一步提高口岸动物检疫的水平，发明一种新的既能满足口岸快速检测技术又能满足实验室精准检测技术要求的方法尤为重要；专利申请201010621890公开了一种用于生物样品中核酸提取纯化的细胞裂解试剂，该试剂溶液呈碱性并含有胍盐、铵根离子及表面活性剂成分，在碱性液相环境下能更充分裂解生物样品中的细胞，并能促进释放到细胞外的核酸(DNA/RNA)与固相材料的结合吸附，最后通过洗脱步骤将核酸从固相材料上分离下来。该专利申请中虽然公开了pH8～13的碱性裂解条件，但通过添加铵根离子仅能使裂解液的pH达到9左右。而通入氨气虽然能达到更高的碱性条件，但氨气易挥发，不便于长期稳定保存，不利于在室外作业。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于动物组织病料核酸的快速提取方法，通过改进核酸提取过程中使用的裂解液，大大简化了核酸提取的方法，操作简便安全，成本低廉，解决了现有核酸提取方法不适应室外环境，检测时间较长以及所用提取试剂含有有毒有害物质存在安全隐患的问题，通过调整裂解液的PH值可实现分别对DNA和RNA的提取，解决了现有试剂盒等方法只能提取单一核酸的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种用于动物组织病料核酸的快速提取方法，包括如下步骤：

(1)配制裂解液；所述裂解液包括胍盐，缓冲剂、表面活性剂，PH调节剂；

(2)组织裂解：将裂解液加入组织样本中，还用匀浆仪匀浆至无可见组织块；

(3)初步分离：放置15分钟，13000g离心5分钟，分离上清液；

(4)核酸沉淀：向上清液中加入若干体积的异丙醇，10000g离心10分钟，弃除上清液，得核酸沉淀；

(5)核酸提纯：使用浓度为75％的乙醇洗涤沉淀物，进行提纯，得所要提取的核酸。

进一步地，所述胍盐为异硫氰酸胍；所述缓冲剂为柠檬酸钠；所述表面活性剂为月桂基硫酸钠；所述PH调节剂为盐酸。

进一步地，所述裂解液配制方法为：称取一定量的异硫氰酸胍、0.75mol/L的柠檬酸钠和10％月桂基硫酸钠，加入去离子水加热搅拌溶解，使用盐酸调节溶液的PH值为7-9之间即可，装入棕色瓶内，室温保存。

进一步地，所述裂解液包括终浓度为4-6mol/L的异硫氰酸胍、20-25mol/L的柠檬酸钠和0.2-0.5％的月桂基硫酸钠。

进一步地，所述核酸为DNA和RNA。

本发明具有以下有益效果

1、本发明通过改进核酸提取过程中使用的裂解液，大大简化了核酸提取的方法，检测时间短，从匀浆到提取完成仅需30分钟。

2、操作简便，适应室外环境，便于口岸动物的快速检疫作业。