[发明专利]生姜茎基腐病群结腐霉的LAMP检测引物及检测方法

说明书

本发明提供了一种生姜茎基腐病群结腐霉的LAMP检测引物及检测方法，包括三引物对：FIP、BIP；F3、B3；LF、LB；所述检测方法如下：反应体系为：反应总体积25μL，1.2μM FIP和BIP，0.4μM F3和B3，0.4μM LF和LB，2.0mM d NTPs，1.2M betaine，10mM Tris‑HCl(pH 8.8)，30mM KCl，5mM(NH₄)₂SO₄，10mM MgSO₄，0.15％Tween‑20，10个单位的Bst 2.0 DNA大片段聚合酶，2.5μL 10×Thermopol反应缓冲液，2μL DNA模板和1μL SYBR Green I荧光染料。本发明建立了一种生姜病原菌田间分子快速诊断方法，有效地指导姜农对症下药，减少农药使用量。

【技术领域】

本发明具体涉及一种生姜茎基腐病群结腐霉的LAMP检测引物及检测方法。

【背景技术】

生姜是全球重要的辛香蔬菜，是我国优势特产蔬菜，单位面积效益居经济作物前列，已成为我国乡村振兴、扶贫攻坚的特色高效产业，重庆市七大特色产业链主推作物。然而，生姜田间病害突发频发，给生姜种植产业造成巨大经济损失。长江上游高温高湿、时晴时雨的气候和粘性的土壤适宜生姜病原菌的繁殖、传播。据调查，在每年的6-8月份，姜瘟病、茎基腐病等田间病害进入高发期，常常是一场雨一场病，轻者减产20％-30％，重者可达80％以上，且一旦大面积发病，很难采取措施补救，给姜农带来巨额损失。

现已查明，生姜病害主要有细菌性病害和真菌性病害，包括姜瘟病青枯菌(R.solanacearum)等4种细菌性病原菌和茎基腐病群结腐霉菌(Pythium myriotylum)等10余种真菌性病原菌。生姜病害在发病初期通常是单一病原菌引起，而病害症状显现后通常会混合多种病原菌，导致复合病症出现，给病原菌诊断带来极大的困难。茎腐病是生姜种植业最具破坏性的病害之一，具有发病时间短、病程进展快、病株致死率高的特点。近年来，随着分子生物学的飞速发展，为植物病害的早期检测鉴定提供了新的技术和方法，植物病原菌的诊断技术己从田间传统诊断、免疫学诊断发展到了以PCR为基础的植物病原菌的分子检测水平，但迄今为止针对生姜病原菌的田间分子检测技术尚未见到报到。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题之一，在于提供一种群结腐霉的LAMP检测引物。

本发明是这样实现的：一种群结腐霉的LAMP检测引物，其特征在于：包括三引物对：FIP、BIP；F3、B3；LF、LB；各引物的核苷酸序列如下：

FIP：5′-TCACTGCGTTCGAAAGTCAC-AGAAGACGCGAGTCCCT-3’

BIP：

5′-GATCGCTCTGCGCGAGTGG-CACCCCGTCAGCTGCAAA-3’；

F3：5′-GTGAGGTGTCTCGCTGGGT-3’；

B3：5′-GCCCCACACAAGACAGGTA-3’；

LF：5′-ACAAGAAAGAGCGAACG-3’；

LB：5′-AAGCAACCTCTATTGGCG-3’。

本发明要解决的技术问题之二，在于提供一种群结腐霉LAMP检测方法。

本发明是这样实现的：一种群结腐霉LAMP检测方法，利用权利要求1所述的LAMP引物进行LAMP反应，LAMP反应体系为：