[发明专利]一种芝麻主要过敏原的质谱定性检测方法

权利要求书

1.一种基于LC-MS/MS-MRM的芝麻过敏原蛋白的检测方法，该检测方法用于检测食品中芝麻过敏原蛋白成分，其特征在于，根据筛选到的特征肽段的离子对，利用LC-MS/MS-MRM方法定性检测样品中的芝麻过敏原蛋白成分，筛选到的芝麻各过敏原蛋白的特征肽段氨基酸序列如下：

Ses i 1特征肽段1：QQQQEGGYQEGQSQQVYQR；

Ses i 2特征肽段1：MC[CAM]GMSYPTEC[CAM]R；

Ses i 3特征肽段1：IPYVFEDQHFITGF；

Ses i 3特征肽段2：SFSDEILEAAFNTR；

Ses i 4特征肽段1：GVQEGTLYVGEK；

Ses i 4特征肽段2：ATGQGPLEYAK；

Ses i 5特征肽段1：APHLQLQPR；

Ses i 6特征肽段1：AFYLAGGVPR；

Ses i 6特征肽段2：IQSEGGTTELWDER；

Ses i 6特征肽段3：ISGAQPSLR；

Ses i 7特征肽段1：FESEAGLTEFWDR；

Ses i 7特征肽段2：EGQLIIVPQNYVVAK；

在MRM-scheduled模式下检测的特征肽段的母子离子对、CE值、保留时间如下表所示：

；筛选芝麻各过敏原蛋白的特征肽段的高分辨质谱方法如下：

液相条件：在线Nano-RPLC液相色谱：EksigentNanoLC-Ultra 2D plus+cHiPLCnanoflex液相色谱系统；色谱柱：C18反相色谱柱，75μm x 15cm C18-3μmChromXPEksigent；上样流速：2μL/min，10min；柱温：40℃；流动相：A：2％乙腈-98％水-0.1％甲酸；流动相B：98％乙腈-2％水-0.1％甲酸；流速0.3μL/min；进样体积4μL；流动相洗脱梯度如下表所示：

质谱条件：5600系统，AB SCIEX；ESI+正离子模式；喷雾电压：2.4kv；雾化气：6psi；气帘气：30psi；质谱扫描模式：信息依赖型采集工作模式；TOF MS模式：350-1500m/z，250ms；IDA TOF MS/MS模式：100-1500m/z，30MS/MS，100ms，IDA threshold：120cps，母离子电荷选择范围为+2～+5；Rolling CE：enabled；Dynamic exclusion time：20s；运行时间：60min。

2.根据权利要求1所述的基于LC-MS/MS-MRM的芝麻过敏原蛋白的检测方法，其特征在于，筛选芝麻各过敏原蛋白的特征肽段的搜库鉴定方法如下：高分辨质谱获得的wiff数据导入Proteinpilot软件，并以UniprotKB中的芝麻蛋白为库搜索鉴定酶切肽段序列；参数设置：Sample Type:Identification；Cys Alkylation:Iodoacetamide；Digestion:Trypsin；Search Effort:Rapid ID；ID Focus:Biological modifications；从中选取响应高、打分20、氨基酸个数6～20、可信度95％、无漏切的肽段作为预选特征肽段，NCBI数据库BLAST比对验证肽段特异性。