[发明专利]T细胞培养基及培养方法

说明书

本发明提供了用于培养T细胞的添加剂，其包括白介素‑2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子‑α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分。另外，本发明还提供了包含该添加剂的T细胞培养基及培养T细胞的方法，可以提高T细胞的增殖率，同时可以提高具有增殖活性T细胞以及免疫功能活化T细胞的比例并减少T细胞发生细胞凋亡的状况。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体而言，本发明涉及一种T细胞培养基及培养方法，其能提高T细胞的增殖率，同时可以提高具有增殖活性的T细胞以及免疫功能活化的T细胞的比例并减少T细胞发生细胞凋亡的状况，并且其只需稍加改变即可灵活地应对不同T细胞的培养。

背景技术

T细胞为淋巴细胞的一种，其来自于人体骨髓的造血干细胞（Hematopoietic stemcells, HSC），T细胞由胸腺迁移到胸腺内而分化成熟，T细胞在胸腺内分化成熟后进一步移居到淋巴组织中。T细胞还可进一步分为毒杀型T细胞（Cytotoxic T cell）及辅助型T细胞（Helper T cell）、调节型T细胞（Regulatory T cell）以及记忆型T细胞（Memory T cell），各类T细胞皆在人体免疫反应中扮演重要角色。因此，近年来T细胞常被用于进行有关于免疫系统的实验研究或是相关范畴的应用，然而，当要以T细胞进行实验研究或是将T细胞应用于其他范畴时，都需要增殖出足够的T细胞。

中国专利申请CN102168067A公开了一种调节性T细胞的诱导培养方法，其中主要使用了细胞因子和地西他滨来联合诱导；中国专利申请CN105154402A公开了一种培养基及其应用，其中包括转铁蛋白、孕酮、干细胞生长因子、IL-2、IL-4等，主要用于CAR-T细胞的培养；中国专利申请CN104278012A公开了一种成人调节性T细胞体外扩增培养基及其使用方法，其中包括转化生长因子-β、骨形态发生蛋白-4、IL-2、IL-4等；中国专利申请CN105969729A公开了一种T细胞培养基及其制备方法，其在RPMI-1640培养基的基础上进一步添加了IL-2、内皮细胞生长因子、转铁蛋白等。

然而，令人意外的是，本发明人研究获得了新的T细胞培养基及其中的添加剂，没有为现有技术所公开和教导。尤其是该T细胞培养基中的添加剂能方便、灵活地与现有的含谷氨酰胺的无血清培养基混合配制成优化的T细胞培养基，分别针对不同T细胞的培养，用于提高T细胞的增殖率，提高具有增殖活性的T细胞以及免疫功能活化的T细胞的比例并减少T细胞发生细胞凋亡的状况。

发明内容

发明简述

本发明要解决的技术问题在于提供一种新的T细胞培养基及其中的添加剂，用于体外培养T细胞。该T细胞培养基中的添加剂能方便、灵活地与现有的含谷氨酰胺的无血清培养基混合配制成优化的T细胞培养基，分别针对不同T细胞的培养，用于提高T细胞的增殖率，提高具有增殖活性的T细胞以及免疫功能活化的T细胞的比例并减少T细胞发生细胞凋亡的状况。

具体而言，在第一方面，本发明提供了用于培养T细胞的添加剂，其包括白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分，其中特异性培养成分选自抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺中的一种。。

优选本发明第一方面的添加剂由白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的特异性培养成分组成，其中特异性培养成分选自抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺中的一种。

也优选在本发明第一方面的添加剂中，所述T细胞是αβ T细胞、γδ T细胞或NK T细胞。

也优选在本发明第一方面的添加剂中，白介素-2、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和趋化因子配体5以及任选的抗-CD3抗体、唑来膦酸和半乳糖苷基神经酰胺的比例为10-6000IU：1-300pg：1-3000pg：50-1500pg：10-100ng：1-20nmol：20-200ng。