[发明专利]一种痰液微生物的快速提纯试剂及其应用

说明书

本发明提出一种痰液微生物的快速提纯试剂，包括液化液、细胞裂解液、核酸外切酶缓冲液；所述细胞裂解液含有胍盐和表面活性剂，所述胍盐在细胞裂解液中的浓度为1～3mol/L。本发明还提出所述痰液微生物的快速提纯试剂的应用。本发明提出的痰液微生物的快速提纯试剂，采用低浓度盐酸胍与表面活性剂及还原剂相结合，完全裂解人细胞(核)，细胞崩解导致基因组DNA释放到溶液中，大部分在离心获取细菌时而被除去，残余的游离DNA将被DNase进一步消化，而细菌由于细胞壁的保护不受影响或者影响很小。

技术领域

本发明属于生命科学领域，具体涉及一种微生物的提纯试剂及应用。

背景技术

痰液中液体主要是由支气管粘膜上皮的分泌粘液的腺体和杯状细胞分泌的。正常情况下，杯状细胞和腺体分泌少量粘液覆盖在粘膜层表面，对粘膜起保护作用，可保持气管粘膜的湿润，以把吸入气管、支气管内的尘埃颗粒、细菌等粘附住，阻挡其进入肺组织深处，然后，再借助于纤毛柱状上皮的纤毛摆动，把它们排到气管上端的喉头部位，经口腔咯出。正常痰一般为无色透明，带有点粘性，略微粘稠，适量的痰液有助于滋润呼吸道，捕捉灰尘和微生物(粘液)。虽然任何咳出痰都可以被认为是异常的，但在没有任何呼吸系统病理改变下也能咳出或吐出少量的痰。然而，在某些情况下，特别是与呼吸道发炎有关，痰量可能会产生过多。在这些病理病例中，痰的颜色、质地甚至气味都可能发生变化。

当气管、支气管和肺受到有害因素的刺激或致病菌感染而发生炎症时，呼吸道的粘膜充血、水肿，大量炎性细胞浸润，血管扩张，渗出增加，粘膜层的杯状细胞和粘膜下层的腺体增生肥大，粘液分泌大量增多，有利于清除异物。粘液分泌过多，就加重了纤毛柱状上皮的负担，不利于粘液的排出，在细菌及其毒素的作用下，产生一些变性坏死组织细胞，潴留在支气管内，粘液和这些变性坏死的组织细胞就构成了痰，比正常痰来有两个特征：一是粘稠度更高，二是颜色也有可能由白色或灰色变为黄色、绿色、铁锈色或棕色，还也可能因为含有少量的血液，有血丝呈现。

根据痰液的粘稠度增加可以将痰简单分为有泡沫(浆液性)痰、粘液性痰和脓性痰。临床上根据吸痰过程中痰液在吸痰管玻璃接头处的性状及在玻璃管内壁的附着情况将痰液的粘稠度分为三度：1度：痰液如米汤或泡沫样，吸痰后玻璃接头内壁上无痰液滞留。2度：痰的外观较1度粘稠，吸痰后有少量痰液在玻璃接头内壁滞留，但容易被水冲净3度：痰的外观明显粘稠，呈黄色，吸痰管常因负压过大而塌陷，玻璃接头内壁上常滞留大量痰液且不易被水冲净。

痰液的粘稠度主要是由于痰中的酸性糖蛋白含量有关，由于糖蛋白分子依靠不同的键(如二硫键、氢键等)交叉联接在一起，形成一种凝胶网。痰液中的Ca²⁺含量高，可以增加粘稠度，显微镜下观察到的长纤维就是由这些粘多糖、黏蛋白构成。呼吸道感染时，由于大量炎症细胞的核破坏而产生的DNA被组蛋白及粘蛋白包裹，亦可使痰液的粘稠度显著提高，见于脓性痰，常呈粗平行纤维。

目前用于富集痰液微生物同时去除人细胞基因组DNA的化学方法及试剂很少，现有通过低渗方法裂解细胞富集微生物的方法富集细菌效果是不均匀的，大部分样品效率低下，而且见于口腔拭子、唾液样品，痰液中的大量高分子粘蛋白难溶于水，因此，未见该方法用于痰液微生物富集的报道。

发明内容

针对本领域存在的不足之处，本发明的目的之一是提出一种痰液微生物的快速提纯试剂。

本发明的第二个目的是提出所述痰液微生物的快速提纯试剂的应用。

实现本发明上述目的的技术方案为：

一种痰液微生物的快速提纯试剂，包括液化液、细胞(核)裂解液、核酸外切酶缓冲液；所述细胞裂解液含有胍盐和表面活性剂，所述胍盐的浓度细胞裂解液中的浓度为1～3mol/L。