[发明专利]一种基于流式细胞术的河砚滤水率快速测定方法

权利要求书

1.一种基于流式细胞术的河砚滤水率快速测定方法，其特征是它包括以下步骤：

（1）河蚬驯养；从自然水体采集河蚬，迅速带回实验室，暂养在水簇箱中，充气培养；每天投喂蛋白核小球藻一次；每天换水一次，换水量为总水量的一半，暂养时间为7d；

（2）藻细胞培养；从中国科学院武汉水生生物研究所中国淡水藻种库购买蛋白核小球藻，利用BG-11培养基扩大培养，培养条件：温度 25℃，光强3000Lex，光照周期12h：12h，每天早晚各摇动一次，并检测藻细胞的生长情况；当细胞进入静止期，离心收集藻细胞，置于4℃冰箱，尽快用于实验；

（3）河蚬滤水率实验；

实验开始前1d河蚬停止喂食，挑选健康河蚬用于实验，体重为1-2g；用1L玻璃烧杯用于实验，添加500mL曝气自来水，放入5只河蚬，15min后加入藻细胞；藻细胞密度设置6个浓度组：10³、5×10³、10⁴、5×10⁴、10⁵、5×10⁵和10⁶ cells/mL，每组设置3个平行；采用静水实验法，实验过程中不充气；为防止藻细胞下沉，每隔半小时用玻璃棒轻轻搅动烧杯中水体；2h后实验结束，从每个烧杯中取1mL水样，装入1.5mL离心管中用于测定藻细胞密度；

（4）用流式细胞仪测定藻细胞密度；

选择具有计数功能的流式细胞仪用于测定藻细胞密度，打开流式细胞仪，待状态稳定后开始检测，设定好流速、时间及计数数量等参数，将待测水样在振荡器充分混匀，直接上样检测，选择侧向角和叶绿素荧光2个参数圈选藻细胞，将细菌排除，获得藻细胞密度；

（5）计算河蚬滤水率； 根据下面公式计算河蚬的滤水率；

FR=V×ln(C₀/C_t)/(N×t)

其中， FR：滤水率（L/h）； V：实验水体积（L）； C_o：实验开始时藻细胞密度（cells/mL）；C_t：实验结束后藻细胞密度（cells/mL）； N：河蚬个体数（个）； t：实验时间（h）；

根据计算所得的河蚬的滤水率，制定科学放养密度和投饵量，以利于河蚬的生态健康绿色养殖。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述的河蚬驯养时暂养用水为曝气48h的自来水，水温控制在23℃，pH在8.0上下，溶氧6.5mg/L以上。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述的河蚬驯养时投喂蛋白核小球藻的藻细胞密度为10⁵cells/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是重复进行滤水率测定并进行统计分析；河蚬在不同藻细胞密度条件下的滤水率采用SPSS软件中的ANOVA方法进行差异性分析；根据分析结果，确定河蚬适宜的投饵量。