[发明专利]用于凋亡细胞识别和标记的融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.用于凋亡细胞识别和标记的融合蛋白Annexin A5-Citrine，其DNA序列如SEQ IDN0:1所示，其蛋白序列如SEQ ID N0:4所示。

2.用于凋亡细胞识别和标记的融合蛋白Annexin A5-Venus，其DNA序列如SEQ ID N0:2所示，其蛋白序列如SEQ ID N0:5所示。

3.用于凋亡细胞识别和标记的融合蛋白Annexin A5-Ypet，其DNA序列如SEQ ID N0:3所示，其蛋白序列如SEQ ID N0:6所示。

4.一种用于凋亡细胞识别和标记的融合蛋白Annexin A5-Citrine的制备方法，其特征为步骤如下：

(1)荧光蛋白Citrine序列的扩增；

(2)将全长的Citrine基因片段通过酶切位点NdeⅠ和XhoⅠ插入到pET28a-Annexin A5-his中，获得了重组质粒pET28a-Annexin A5-Citrine-his；

(3)将重组质粒pET28a-Annexin A5-Citrine-his转化Top10感受态细胞，大量获得重组质粒pET28a-Annexin A5-Citrine-his并转化到表达菌株BL21感受态细胞中，获得表达Annexin A5-Citrine的质粒和菌株；

(4)培养表达Annexin A5-Citrine的菌株；

(5)破菌，提取蛋白获得蛋白Annexin A5-Citrine。

5.一种用于凋亡细胞识别和标记的融合蛋白Annexin A5-Venus的制备方法，其特征为步骤如下：

(1)荧光蛋白Venus序列的扩增；

(2)将全长的Venus基因片段通过酶切位点NdeⅠ和XhoⅠ插入到pET28a-Annexin A5-his中，获得了重组质粒pET28a-Annexin A5-Venus-his；

(3)将重组质粒pET28a-Annexin A5-Venus-his转化Top10感受态细胞，大量获得重组质粒pET28a-Annexin A5-Venus-his并转化到表达菌株BL21感受态细胞中，获得表达Annexin A5-Venus的质粒和菌株；

(4)培养表达Annexin A5-Venus的菌株；

(5)破菌，提取蛋白获得蛋白Annexin A5-Venus。

6.一种用于凋亡细胞识别和标记的融合蛋白Annexin A5-Ypet的制备方法，其特征为步骤如下：

(1)荧光蛋白Ypet序列的扩增；

(2)将全长的Ypet基因片段通过酶切位点NdeⅠ和XhoⅠ插入到pET28a-Annexin A5-his中，获得了重组质粒pET28a-Annexin A5-Ypet-his；

(3)将重组质粒pET28a-Annexin A5-Ypet-his转化Top10感受态细胞，大量获得重组质粒pET28a-Annexin A5-Ypet-his并转化到表达菌株BL21感受态细胞中，获得表达AnnexinA5-Ypet的质粒和菌株；

(4)培养表达Annexin A5-Ypet的菌株；

(5)破菌，提取蛋白获得蛋白Annexin A5-Ypet。

7.融合蛋白Annexin A5-Citrine在凋亡细胞识别和标记中的应用。

8.融合蛋白Annexin A5-Venus在凋亡细胞识别和标记中的应用。

9.融合蛋白Annexin A5-Ypet在凋亡细胞识别和标记中的应用。