[发明专利]一种制备cfDNA参考品的方法

权利要求书

1.一种制备cfDNA标准品或参考品的方法，包括以下步骤：

使用基因组DNA进行超声打断处理，时间为400秒至480秒。

2.如权利要求1所述方法，其中超声负载率为30％至50％。

3.如权利要求1或2所述方法，其中所述基因组DNA的质量为1μg至5μg。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中所述基因组DNA为肿瘤细胞的基因组DNA，优选所述肿瘤细胞为H1975、A549、PC9中的至少一种。

5.如权利要求4所述的方法，还包括以下步骤：

将来源于H1975、A549、或PC9通过超声打断形成的DNA片段进行掺比，制备突变位点L858R、T790M、Exon19 del均为相同突变比例的cfDNA标准品或参考品，其中突变比例优选为0.1％、5％、或20％。

6.如权利要求1至5任一项所述的方法，所述超声打断处理优选为400秒至450秒，更优选为420秒。

7.如权利要求1至5任一项所述的方法，所述负载率优选为20％至40％，更优选为30％。

8.如权利要求1至5任一项所述的方法，所述基因组DNA的质量优选为5μg。

9.如权利要求1至5任一项所述的方法，其中超声后DNA片段的主浓度峰在150-200bp之间，DNA拷贝数的理论回收率60％以上。

10.如前任一项所述的方法制备的cfDNA标准品或参考品。

11.如权利要求10所述的cfDNA标准品或参考品，其包括150bp至200bp大小的DNA片段，所述cfDNA标准品或参考品进一步优选包括药学上可接受的缓冲液。

12.如权利要求10所述cfDNA标准品或参考品在制备用于定量和定性检测体液中游离DNA或其基因突变中产品的应用，所述体液包括血浆、血清、脑脊液、胃液、胆汁、淋巴液、尿液、滑膜液中的至少一种。

13.如权利要求10所述cfDNA标准品或参考品中还包括作为基质的体液，所述体液包括血浆、血清、脑脊液、胃液、胆汁、淋巴液、尿液、滑膜液中的至少一种，其中体液可以是天然的，也可以是人造的。