[发明专利]一种重组羊长效干扰素及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制备方法

说明书

本发明公开了一种重组羊长效干扰素及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制备方法，所述融合蛋白由羊白细胞介素2与羊干扰素τ经柔性linker连接而形成，融合蛋白与冻干保护剂混配后冷冻干燥即可得到重组羊长效干扰素。所述重组羊长效干扰素可显著提高羊干扰素的半衰期，较普通羊干扰素的半衰期提高8倍以上，并具有广谱抗病毒作用并能提高羊自身的免疫应答。

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，具体涉及一种重组羊长效干扰素及制备此长效干扰素的融合蛋白 及其制备方法。

背景技术

由病毒引起的动物传染性疾病严重制约了各个国家和地区养殖业的健康发展，中国是世界上羊存栏 量、出栏量、羊肉产量最多的国家，肉羊产业也是我国畜牧业的重要支柱产业之一。随着羊养殖业的持续 发展，不可避免的要面对病毒引起的疾病的问题，畜类疾病不仅给羊养殖者造成巨大的经济损失，更为严 重的是，一些人兽共患传染性疾病还给人类健康带来潜在威胁。

目前羊类传染性疾病的防治主要采用疫苗免疫和药物治疗，由于疫苗免疫的血清型单一，而病毒的血 清型复杂，毒株变异快，常导致疫苗免疫失败。一些病毒病目前尚无疫苗可用，有些病毒也可能直接危害 到人类的健康。

常用的药物治疗主要采用抗生素进行治疗，但是近年来由于抗生素的广泛和大量使用，导致耐药性菌 株大量产生，并通过食物链传染给人，给人类健康带来更大的威胁。现在一些国家己明令禁止一些抗生素 和抗菌剂在养殖业中的应用。因此，使用干扰素来积极治疗和预防家畜、家禽的病毒性疾病将是人类最为 关注的问题。

IFN是一类病毒感染诱导机体产生具有广谱抗病毒、抗肿瘤和具有免疫调节作用的蛋白质，1957年 Issacs和Lindeman首先发现，它是一类多功能的细胞因子，与细胞受体结合后，可诱导机体产生多种特异 性蛋白质和酶类，主要通过抑制病毒基因转录和降解病毒RNA来抑制病毒的生长繁殖以及发挥抗肿瘤等 的活性。按照IFN的产生细胞、生化特征及在机体免疫方面所发挥作用的不同，分为α、β、γ三类。现已 知，α型IFN在体内可有选择性地作用于病毒等感染细胞，通过抑制受染细胞内的病毒蛋白质的生物合成， 发挥广谱和高效抗病毒作用。

干扰素τ(interferon tau，IFN-τ)最初被称为滋养层蛋白，由滋养层分泌的一类新型的I型IFN，是反 刍动物母体妊娠识别的孕体信号，在黄体维持和妊娠建立过程中发挥重要的生物学功能。干扰素-τ具有Ⅰ 型干扰素的共同特性:具有抗病毒、抗细胞增生、免疫调节等功能。IFN-τ在生物学功能方面有自身特点， 它仅在胚胎滋养层细胞中表达，无需病毒诱导，而且比IFN-α/β更少的细胞毒性。基于其特有的生物学活 性及低细胞毒性，为许多疾病的治疗带来新的希望。

IL-2即白细胞介素-2，又名T细胞生长因子。主要由活化的T淋巴细胞产生的具有广泛生物活性的细 胞因子，既可以促进淋巴细胞增殖，增强免疫功能，又能限制T细胞反应而增强机体的免疫耐受，故可用 于治疗肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病。在医学领域上商品化的重组人IL-2已经用于肿瘤、艾滋病、 乙型肝炎等疾病的治疗。在兽医中，由于IL-2能提高疫苗的免疫应答和减少疾病的发生，也出现广阔的应 用前景。

天然干扰素及人工重组干扰素目前普遍存在半衰期短的局限，半衰期一般为2-4个小时。半衰期短给 治疗带来了极大的不便，治疗次数的增加，相应的时间成本及经济成本随之增加，而机体的耐受极限也有 可能被突破导致不良反应的产生。半衰期短的主要原因有两个：干扰素的分子量过小在体内代谢过快，干 扰素尤其是重组干扰素亲和力较差被免疫系统清除。而市面上常见的长效干扰素以聚乙二醇融合干扰素为 代表，仅在分子量的层面上部分解决了干扰素分子量小而导致半衰期短的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种重组羊长效干扰素及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制 备方法，所述重组羊长效干扰素可显著提高羊干扰素的半衰期，较普通羊干扰素的半衰期提高8倍以上， 并具有广谱抗病毒作用并能提高羊自身的免疫应答。