[发明专利]一种VEGF-D单克隆抗体及试剂盒

说明书

本发明公开了一种VEGF‑D单克隆抗体，其重链的氨基酸序列如VH：BAA24264所示，其轻链的氨基酸序列如VL：XP_009304362所示。所述VEGF‑D单克隆抗体具有较高的亲和力，特异性强，在体外具有良好的生物学活性。将本发明VEGF‑D单抗与VEGF‑D多抗建立的VEGF‑D蛋白检测试剂盒可作为评价肿瘤淋巴管生成和淋巴转移指标。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种VEGF-D单克隆抗体及VEGF-D蛋白检测试剂盒。

背景技术

在肿瘤转移机制的研究中，淋巴系统作为肿瘤尤其是实体瘤转移通道的重要意义不断被认识。临床病理学研究显示实体瘤播散的最早途径是经淋巴道的区域性淋巴结播散。目前大多数研究都认为，VEGF-D/VEGFR-3信号系统是肿瘤淋巴管生成最重要的调控机制，并在肿瘤淋巴转移过程中发挥了重要作用。

VEGF-D是1998年Achen等^[1]用计算机进行同源搜索时发现的，与VEGF-C结构相似，定位于染色体Xp22.31。VEGF-D在人体结合内皮细胞受体，蛋白水解程序可以调控VEGF-D的生物活性。VEGFR-3最早从人胎盘和红白血病细胞基因库中克隆出来，定位于染色体5q33-5q35，与VEGFR-1、VEGFR-2同属于受体型酪氨酸蛋白激酶家族。VEGFR1和VEGFR2主要表达于血管内皮细胞，VEGFR-3主要表达于淋巴管内皮细胞。所有VEGFR都具有相同的7个细胞外免疫球蛋白同源区域，其中第2和第3个区域是配体结合的关键部位，并且前3个区域是建立完整结合的必须条件。肿瘤组织中淋巴管生成增加，表现为淋巴管内皮细胞增殖，肿瘤组织淋巴管密度明显增高，并与淋巴结转移相关。VEGF-D可以诱导肿瘤组织内部和肿瘤组织周围淋巴管生成，并与显著增加的淋巴脉管浸润和淋巴结转移率相关。对人类许多肿瘤的临床研究也证实，高表达的VEGF-C或D与肿瘤患者淋巴结转移、淋巴管浸润以及不良预后相关。

临床研究的结果证实VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3信号系统在肿瘤淋巴转移过程中发挥了重要作用。目前研究认为其机制可能是：肿瘤细胞分泌淋巴管内皮生长因子VEGF-C、D以旁分泌的形式作用于淋巴管内皮细胞上的酪氨酸激酶受体VEGFR-3，经过信号传导，最终引起淋巴管内皮细胞的增殖、分化、迁移和管腔形成，肿瘤组织淋巴管密度增加。这些肿瘤组织内增多的淋巴管与生理状态下的淋巴管结构相似，但数量增多，管壁薄，多位于肿瘤实质周围，因此这就为肿瘤细胞浸润转移提供了更多的通道，有利于肿瘤细胞转移扩散和淋巴结转移。除此以外，VEGF-C、D与VEGFR-3结合后能够促进淋巴管内皮细胞释放蛋白水解酶类，促进肿瘤细胞的基质浸润，同时还可改变淋巴管内皮细胞的黏附特性、表面趋化因子及其受体的表达，影响肿瘤细胞进入淋巴管的过程，从而主动促进肿瘤淋巴管转移。