[发明专利]SRSF10作为靶位点在制备治疗肝癌药物中的应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及SRSF10作为靶位点在制备治疗肝癌药物中的应用。所述肝癌是HCC。所述靶位点为SIRT1靶位点。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及SRSF10作为靶位点在制备治疗肝癌药物中的应用。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是严重困扰和威胁现代人健康的恶性肿瘤，占恶性肿瘤死亡总数的18.8％。尽管手术切除、肝移植及术后放化疗、分子靶向治疗等在肝癌的治疗中取得了较大进展，肝癌患者的总体生存率较前未有明显提高。肝细胞癌具有高复发率、高死亡率、预后差等特点，其原因是肝细胞早期诊断、检查方法尚不规范，未能及时发现及早期诊断治疗。积极探索新的肝癌发生发展机制并及时干预，对提高肝癌疗效和综合生存率具有重要意义。

Sirtuins蛋白家族由沉默信息调控子2(SIR2)的同源序列构成，是高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的组蛋白去乙酰化酶。迄今为止，7种SIR2的同源序列被鉴别出，位于细胞核内的SIRT1受到关注最多。SIRT1在个体中广泛分布，在肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胰腺、大脑和骨骼肌中均可检测到SIRT1的表达。越来越多的证据表明SIRT1可以通过其去乙酰化酶活性影响多种蛋白的翻译后修饰(PTM)，如调节非组蛋白p53、Fox O1、FoxO3a、PGC-1α和NF-κB的乙酰化水平。其中，对某些SIRT1的靶蛋白来说，乙酰化形式是其活性形式，如NF-κB，SIRT1使其去乙酰化后会使其失活并抑制其介导衰老相关因子的分泌；而多数靶蛋白如Notch，去乙酰化形式是其活性形式，通过对这些蛋白活性的调控，SIRT1可以调节多种信号转导途径介导DNA损伤、能量代谢、糖异生、糖酵解、脂肪酸代谢、激素分泌和免疫反应等。SIRT1在肝癌发生发展过程中的作用机理尚不明确，阐明SIRT1的调控机制，为预防及治疗肝脏肿瘤提供新的作用靶点和实验依据，具有十分重要的临床意义。

发明内容

本研究目的在于为制备治疗肝癌药物提供新的靶位点。在本发明中，我们对肝癌细胞Hep3B行SIRT1过表达，利用蛋白组学、乙酰化组学芯片检测检测并发现m6A下游选择性剪切(Alternative splicing,AS)分子SRSF10表达明显上调。进一步证实SIRT1通过活化转录因子TLX1来显著上调SRSF10表达，进而影响mRNA选择性剪切显著下调抑癌基因PDCD4、S100A14、BCAM等表达。因此本发明中的发现极有可能为肝脏肿瘤预测及治疗提供新的药物。

本发明提供了SRSF10作为靶位点在制备治疗肝癌药物中的应用。所述肝癌是HCC。所述靶位点为SIRT1靶位点。

我们首先在不同肝癌细胞株测定其内源SIRT1表达量，发现SIRT1在Hep3B中表达，在SMMC-7721中高表达，可作为SIRT1过表达/沉默稳定转染工具细胞(图1A)。进一步发现肝癌组织中SIRT1免疫组化分值显著高于对应的癌旁组织。SIRT1可致细胞增殖率显著升高。

蛋白组学及乙酰化组学提示选择性剪切分子SRSF10在SIRT1转染细胞中表达上升，同时其乙酰化水平显著下降。已有文献报道，RNA行m6A修饰后可通过m6A readerYTHDC1识别，进而招募剪切分子SRSF3，使该段RNA倾向于保留，增加mRNA拷贝数及上调蛋白表达；而剪切分子SRSF10竞争性拮抗YTHDC1-SRSF3复合体，使该段RNA倾向于被剪切，可能是目的蛋白下调的原因之一。而识别分子YTHDC1及剪切分子SRSF3无明显变化，为此我们探索SRSF10对下游相关抑癌基因的影响，敲除SRSF10后，PDCD4、S100A14显著上调。细胞功能实验进一步证明了SIRT1对肝癌细胞增殖、侵袭的促进作用，而SRSF10沉默干预可阻断或逆转SIRT1相关细胞生物学功能改变。这表明，SRSF10在SIRT1致m6A修饰改变后的mRNA剪切进程中发挥重要作用。