[发明专利]一种荧光定量PCR探针技术联合检测沙眼衣原体、淋球菌、生殖道支原体的方法和试剂盒

说明书

本公开提供了一种引物探针组，该引物探针组用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体，该引物探针组包括：CT引物对、CT探针、MG引物对、MG探针、NG引物对和NG探针。另一方面，本公开还提供了一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的方法。再一方面，本公开还提供了一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的试剂盒。通过上述技术方案，本公开能够以更高的灵敏度且更好的特异性，实现对沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测。

技术领域

本公开涉及医药生物技术领域，具体地，涉及一种用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的探针引物组、一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的方法以及一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的试剂盒。

背景技术

世界卫生组织估计全球每年约有3.4亿新增性传播感染病例，其中沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)和淋球菌(Neisseria gonorrhoeae，NG)以及生殖道支原体(Mycoplasma genitourinary，MG)是最常见的三种病原体，导致了包括宫颈炎、盆腔炎、淋病、急性尿道综合症等多种不同症状的性病，并由此进一步导致不孕、胚胎夭折、低体质量胎儿和死胎等严重后果。因此开展沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的病原检测及鉴定对于临床性病的早期发现、早期治疗、降低疾病风险和控制传染性疾病具有重要的意义。

已经有多份文献公开了沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测。例如：CN101935686A公开了一种淋球菌、人型支原体、生殖器支原体、沙眼衣原体、解脲支原体的检测方法和试剂盒，其中使用了多重PCR凝胶电泳分离方法；CN102277429A公开了一种淋球菌、沙眼衣原体及解脲脲原体的试剂盒，其中使用了芯片法；CN102888464A公开了在单个PCR反应容器中五重检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体检测试剂盒，其中使用了荧光探针PCR法。

但是，实验结果显示，已有的沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测方法存在灵敏度低和特异性差的缺陷。

发明内容

本公开的目的是克服已有的沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的联合检测方法存在灵敏度低和特异性差的缺陷，提供一种灵敏度高且特异性好的联合检测沙眼衣原体、淋球菌和生殖器支原体的方法。

为了实现上述目的，一方面，本公开提供了一种引物探针组，该引物探针组用于荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体，其特征在于，该引物探针组包括：CT引物对、CT探针、MG引物对、MG探针、NG引物对和NG探针；其中，所述CT引物对包括SEQID NO.1所示的正向CT引物和SEQ ID NO.2所示的反向CT引物；所述CT探针如SEQ ID NO.3所示且标记有第一荧光基团；所述MG引物对包括SEQ ID NO.4所示的正向MG引物和SEQ IDNO.5所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQ ID NO.6所示且标记有第二荧光基团；所述NG引物对包括SEQ ID NO.7所示的正向MG引物和SEQ ID NO.8所示的反向MG引物；所述MG探针如SEQ ID NO.9所示且标记有第三荧光基团；所述第一荧光基团、所述第二荧光基团和所述第三荧光基团彼此相同或不同。

另一方面，本公开还提供了一种荧光定量PCR联合检测沙眼衣原体和淋球菌以及生殖道支原体的方法，所述方法包括如下步骤：(1)提取待测样本的总DNA；(2)以所述总DNA为模板，并使用如上所述的引物探针组，进行荧光定量PCR反应；(3)收集不同检测通道的荧光信号，得到检测结果；a)若所述第一荧光基团对应的荧光通道有扩增曲线，则判定样品中含有沙眼衣原体；b)若所述第二荧光基团对应的荧光通道有扩增曲线，则判定样品中含有生殖道支原体；c)若所述第三荧光基团对应的荧光通道有扩增曲线，则判定样品中含有淋球菌。