[发明专利]一种花生条纹病毒接种方法

说明书

本发明提出一种花生条纹病毒的接种方法，属于植物病毒接种技术领域，该方法能够简单、高效的完成花生条纹病毒的接种。该技术方案省略了接种前在植株上喷洒金刚砂的步骤，而是将金刚砂同病毒叶片及磷酸盐缓冲液一起配制成匀浆，以少量的病毒叶片即可完成高效的接种。该方法提高了花生条纹病毒的接种速度和接种效率，有利于快速高效的鉴定花生对条纹病毒的抗性，加快抗病育种选育和病毒致病机理研究。

技术领域

本发明属于植物病毒接种技术领域，尤其涉及一种花生条纹病毒的接种方法。

背景技术

目前，花生条纹病毒在我国长江以北花生产区普遍发生，在病毒类病害中，花生条纹病毒对我国花生产业的影响最为严重，为花生生产的重要防控对象。花生条纹病毒高效接种是花生条纹病毒种质培育和抗病机制研究的重要基础，是实现花生条纹病毒高效防控的关键。

机械摩擦接种是目前常用的花生条纹病毒的接种方法，这种方法一般采用接种时先在花生叶片上喷洒金刚砂完成。但是，机械摩擦接种需要较多的感病毒材料，且金刚砂的用量不好控制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单、高效的花生条纹病毒接种方法，以少量的感病毒材料即可完成高效的接种，实现花生条纹病毒高效防控，为花生条纹病毒种质培育和抗病机制研究提供重要基础。

为了达到上述目的，本发明提供了一种花生条纹病毒接种方法，包括以下步骤：

取被花生条纹病毒侵染的病毒叶片，依次加入磷酸盐缓冲液、金刚砂，研磨至匀浆；

取上述匀浆置于待接种的已长出两个羽状复叶的花生叶片上，轻轻涂抹数次，清水冲洗。

作为优选，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2-7.4。

作为优选，所述被花生条纹病毒侵染的病毒叶片的保存温度为-80～-60℃。

作为优选，所述1g花生病毒叶片中加入30～50mL磷酸盐缓冲液。

作为优选，所述花生病毒叶片与金刚砂的质量比为1:1～4:1。

作为优选，所述匀浆的用量为40～60μL，所述涂抹数次为2～3次。

与现有技术相比，本发明提供了一种简单、高效的花生条纹病毒接种方法，该方法省略了接种前在植株上喷洒金刚砂的步骤，而是将金刚砂同病毒叶片及磷酸盐缓冲液一起配制成匀浆，以少量的病毒叶片即可完成高效的接种。该方法提高花生条纹病毒的接种速度和接种效率，有利于快速高效的鉴定花生对条纹病毒的抗性，加快抗病育种选育和病毒致病机理研究。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例提供了一种花生条纹病毒的接种方法，包括以下步骤：

S1：取被花生条纹病毒侵染的病毒叶片，依次加入磷酸盐缓冲液、金刚砂，研磨至匀浆。

在该步骤中，被花生条纹病毒侵染的病毒叶片通过以下方式采集：

用打孔器采集被花生条纹病毒侵染的花生新鲜叶片，得到圆形、直径为0.9cm的病毒叶片。

该步骤采用磷酸盐缓冲液的原因在于磷酸盐缓冲液具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，优选pH值为7.2-7.4；金刚砂的加入主要为了在摩擦过程中制造伤口，使病毒能够有侵染途径，另外，在配制匀浆的过程中加入金刚砂，有利于使病毒叶片研磨的更加均匀，使寄生在病毒叶片细胞中的病毒能够更加充分地释放出来。