[发明专利]检测人血清中内质网膜蛋白复合体亚单位10的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测人血清内质网膜蛋白复合体亚单位10的试剂盒。本发明提供了用于检测人血清中EMC10含量的试剂盒，包括捕获抗体(抗EMC10的单克隆抗体6B9，由小鼠杂交瘤细胞株6B9 CGMCC No.15789分泌产生)和检测抗体(抗EMC10的单克隆抗体1F12，由小鼠杂交瘤细胞株1F12 CGMCC No.15788分泌产生)。本发明以小鼠杂交瘤细胞株6B9分泌产生的单抗作为捕获抗体，小鼠杂交瘤细胞株1F12分泌产生的单抗作为检测抗体，制备了用于检测人血清中EMC10含量的试剂盒，已经成功在中国人群和高加索人群血清中检测到了EMC10，且检测线很低，并且这个方法已经非常稳定。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测人血清中内质网膜蛋白复合体亚单位10的试剂盒。

背景技术

内质网膜蛋白复合体亚单位10(ER membrane protein complex subunit 10,EMC10)最初由王宣春等人从人胰岛素瘤组织的cDNA文库中克隆得到，当时命名为:INM02，已将INM02基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列投递到GenBank数据库(登录号为：AY194293)[1]。王宣春所在团队在国际上首次报导了INM02基因的克隆及初步功能研究，文章已发表在《Journal of Endocrinology》杂志上[2]。因为EMC10与任何已知的蛋白或蛋白域均没有明显的同源性，所以EMC10被认为是一个新的蛋白。王宣春所在团队一直从事EMC10的研究工作，经过近10年的努力，已经揭示了EMC10的多种生物学功能。利用课题组建立的ELISA方法，在国际上首次报导了EMC10是一个在人血清中可以被检测得到的分泌蛋白，并且发现在小鼠胰岛β细胞中Emc10(Inm02)基因的表达受葡萄糖的调控，提示它在糖代谢中可能发挥重要的作用[2]。王宣春所在团队已成功建立了Emc10基因剔除的小鼠模型，发现Emc10基因缺失小鼠的3个重要表型，包括：糖耐量改善、抵抗饮食诱导的肥胖以及雄性不育，并初步明确了导致上述表型的病因和分子机制。Emc10基因缺失小鼠胰岛β细胞重量增加，空腹和葡萄糖刺激后的血清胰岛素水平显著升高，能够显著改善普通饮食和高脂饮食小鼠的糖耐量。Emc10基因敲除会导致雄性小鼠完全不育，缺少Emc10基因的精子表现出多方面的缺陷，包括形态学的异常、精子运动力减弱、精子获能受损、顶体反应缺失，因此无法使完整的和去透明带的卵子受精，然而，胞浆内单精注射技术(ICSI)能够挽救EMC10基因敲除导致的雄性不育。从机制上说，EMC10缺失会导致钠/钾-ATP酶失活，引起精子细胞内钠离子水平增加，从而导致精子运动力减弱、形态学异常；此外，EMC10缺失导致HCO₃^-诱导的cAMP/PKA信号通路激活受损以及精子获能相关蛋白酪氨酸磷酸化水平的下降；王宣春所在团队的研究显示EMC10通过维持精子内Na⁺、HCO₃^-的平衡，在雄性生育中发挥着不可或缺的作用。此外，他们还发现EMC10缺失能够阻止小鼠出现饮食诱导的肥胖，改善糖耐量异常、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、高瘦素血症以及高脂血症等肥胖相关的代谢紊乱；而过表达EMC10则促进小鼠肥胖及其代谢紊乱的发生；代谢笼研究显示，通过增加棕色和皮下脂肪的耗氧量，高脂饮食的Emc10基因缺失小鼠的能量消耗显著高于野生小鼠；通过增强PKA/CREB和p38MAPK通路的活性，EMC10缺失既能促进基础状态下又能促进beta肾上腺素能激动剂刺激的脂肪细胞中UCP1和PGC1a基因的表达；上述结果提示EMC10在能量代谢调控和肥胖发生中的发挥重要的作用。