[发明专利]一种检测痕量单链DNA片段的方法

说明书

本发明提供的一种检测痕量单链DNA片段的方法，包括以下步骤：设计粘性末端Adapter对，包括Adapter L和Adapter R；其中，Adapter L用于捕获目标DNA片段的5`端，Adapter R用于捕获目标DNA片段的3`端；向含目标DNA片段的样品中加入粘性末端Adapter对反应，在DNA Ligase的作用下，使Adapter对与目标DNA片段的粘性末端连接；产物纯化后，通过PCR扩增即得富集后的目标DNA。本发明粘性末端Adapter对用于捕获低起始量的目标DNA，使其获得大量富集；该Adapter对用于DNA片段富集，操作流程简单，能够快速获得大量的DNA片段，从而解决最为前沿的NGS文库构建、芯片杂交、荧光免疫等具体分子生物学检测领域的样品制备困难的问题。

技术领域

本发明涉及分子生物实验技术领域，具体涉及一种检测痕量单链DNA片段的方法。

背景技术

随着生物科学技术的发展，分子生物学实验技术也蓬勃繁荣。该技术在科研实验室、农业育种、临床诊疗等方面发挥着重要的作用。

在科研方面，单克隆制备技术，使得研究员能够方便地获得目的产物。在育种方面，将一个促高产的基因，通过克隆，转入到另一物种，使其获得高产特性。其他实验室则使一种农业作物获得耐寒、耐旱、耐盐碱等特性，等等，不胜枚举。

临床诊疗过程中，也不断使用新兴的分子生物学技术。从最初的PCR扩增技术、免疫组化技术，到荧光定量PCR技术、荧光细胞观察技术，最后到高通量测序技术以及后续更加前沿技术等。技术的更新迭代，使得原始投入的DNA量越来越少，最初的ug级别到后来几百ng级别。更甚者，数字PCR可以检测数个拷贝数的异常，其投入量不超过40ng。 DNA的投入量的降低，可用于检测的样品范围越来越广，经常出现部分样品提取的DNA 过于量少，无法满足任何一种检测手段的情况。针对这样的情况，本发明引入一种粘性末端Adapter对设计及其使用方法，可简单、快速、方便地富集地量的目标DNA片段。

发明内容

技术问题：为了解决现有技术的缺陷，本发明提供了一种检测痕量单链DNA片段的方法。

技术方案：本发明提供的一种检测痕量单链DNA片段的方法，包括以下步骤：

(1)设计粘性末端Adapter对，包括Adapter L和Adapter R；其中，Adapter L 用于捕获目标单链DNA片段的5`端，Adapter R用于捕获目标单链DNA片段的3`端；

(2)向含目标单链DNA片段的样品中加入粘性末端Adapter对反应，在DNA Ligase的作用下，Adapter对与目标单链DNA片段的粘性末端连接；

(3)步骤(2)产物纯化后，通过PCR扩增即得富集后的目标单链DNA片段。

优选地，所述检测痕量单链DNA片段的方法，包括以下步骤：

(1)使用核酸检测仪对单链DNA片段进行质控；

(2)向PCR管中加入1ul质控后的单链DNA片段，再加入反应试剂，在PCR仪中20-37℃下反应30min，反应试剂为：