[发明专利]一种高表达的耐热酸性木聚糖酶基因及其表达载体和应用在审

专利信息
申请号: 201810611547.3 申请日: 2018-06-14
公开(公告)号: CN108823224A 公开(公告)日: 2018-11-16
发明(设计)人: 周洪波;唐诗哲;郭宁;郑甲;程海娜;彭晶;徐挺亮;周凯燕 申请(专利权)人: 中南大学
主分类号: C12N15/56 分类号: C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12N9/42;C12R1/84
代理公司: 长沙市融智专利事务所 43114 代理人: 袁靖
地址: 410083 湖南*** 国省代码: 湖南;43
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摘要:
搜索关键词: 耐热 酸性木聚糖酶基因 重组菌株 酸性木聚糖酶 毕赤酵母 表达载体 高表达 组成型 应用 重组毕赤酵母 基因表达量 诱导型载体 高效表达 扩大生产 目的蛋白 序列构建 优化基因 表达量 黑曲霉 野生型 诱导型 构建 生产成本 筛选 基因 优化 转化 改造
【权利要求书】:

1.一种高表达的耐热酸性木聚糖酶基因,其特征在于:其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.含有权利要求1所述的高表达的耐热酸性木聚糖酶基因的重组表达载体。

3.权利要求2所述的高表达的耐热酸性木聚糖酶基因的重组表达载体,其特征在于,所述的重组表达载体为重组真核表达载体,优选酵母表达载体;进一步优选毕赤酵母表达载体。

4.根据权利要求3所述的高表达的耐热酸性木聚糖酶基因的重组表达载体,其特征在于,所述的重组真核表达载体中空白载体来源于商用的pGAPZαA、pGAPZαB、pGAPZαC三种载体中的任一种,或者商用的pPICZαA、pPICZαB和pPICZαC三种载体中的任一种,或者pPIC9K,或者pPIC3.5K。

5.根据权利要求4所述的高表达的耐热酸性木聚糖酶基因的重组表达载体,其特征在于,所述的重组真核表达载体中空白载体来源于商用的组成型载体pGAPZαA、pGAPZαB、pGAPZαC三种载体中的任一种,或者商用的诱导型载体pPICZαA、pPICZαB和pPICZαC三种载体中的任一种。

6.根据权利要求5所述的高表达的耐热酸性木聚糖酶基因的重组表达载体,其特征在于,

当选用空白载体为组成型载体时,所述的高表达的耐热酸性木聚糖酶基因在重组载体中位于α分泌引导肽基因序列下游,优选将高表达的耐热酸性木聚糖酶基因序列插入到组成型载体中的XhoI和XbaI限制性酶切位点之间,使该核苷酸序列位于GAP启动子下游并受其调控,得到重组酵母表达质粒pGAPZα-XynZNOp;

当选用空白载体为诱导型载体时,所述的高表达的耐热酸性木聚糖酶基因在重组载体中位于α分泌引导肽基因序列下游,优选将高表达的耐热酸性木聚糖酶基因序列插入到诱导型载体中的XhoI和XbaI限制性酶切位点之间,使该核苷酸序列位于AOX1启动子下游并受其调控,得到重组酵母表达质粒pPICZα-XynZNOp。

7.包含权利要求2-6任一项所述的重组表达载体的高表达耐热酸性木聚糖酶的基因工程菌。

8.根据权利要求7所述的基因工程菌,其特征在于:所述基因工程菌的宿主细胞为毕赤酵母细胞。

9.根据权利要求7所述的基因工程菌,其特征在于:是将所述的重组表达载体导入毕赤酵母X-33或GS115中获得的重组毕赤酵母细胞。

10.一种高表达的耐热酸性木聚糖酶基因的应用,其特征在于:用于表达耐热酸性木聚糖酶。

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