[发明专利]基于相转变溶菌酶纳米薄膜对微生物非基因改造的方法有效
| 申请号： | 201810586328.4 | 申请日： | 2018-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN108976362B | 公开（公告）日： | 2020-11-17 |
| 发明（设计）人： | 杨鹏;刘瑞瑞 | 申请（专利权）人： | 陕西师范大学 |
| 主分类号： | C08F289/00 | 分类号： | C08F289/00;C08F220/28;C12N1/00 |
| 代理公司： | 西安永生专利代理有限责任公司 61201 | 代理人： | 高雪霞 |
| 地址： | 710062 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 转变 溶菌酶 纳米 薄膜 微生物 基因 改造 方法 | ||
1.一种基于相转变溶菌酶纳米薄膜对微生物非基因改造的方法，其特征在于该方法由下述步骤组成：
(1)将三乙胺、溶菌酶溶解于二甲亚砜中，在冰浴冷却和氮气保护下，加入N-琥珀酰亚胺-2-溴异丁酸酯，室温搅拌4～5小时，然后将反应液在去离子水中透析，得到接枝引发剂的溶菌酶；
(2)将1～100mmol/L三(2-羧乙基)膦的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液用NaOH调节至pH值为5.0～10.0，然后将其与1～50mg/mL溶菌酶的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液混合均匀，并加入微生物，再将所得溶液铺展在基材表面，室温培育30～60分钟；随后将基材转移到质量分数为0.1％～1％的戊二醛水溶液中，室温交联30～60分钟，形成微生物活化涂层，即负载微生物的基材；
(3)将1～100mmol/L三(2-羧乙基)膦的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液用NaOH调节至pH值为5.0～10.0，然后将其与1～50mg/mL接枝引发剂的溶菌酶的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液混合均匀，再将负载微生物的基材倒扣在混合溶液表面，室温培育30～60分钟，使微生物表面粘附一层接枝引发剂的溶菌酶纳米薄膜，得到接枝引发剂的微生物；
(4)将接枝引发剂的微生物浸没于0.12mol/L氯化钠水溶液中，在氮气保护下加入溴化亚铜和五甲基二乙烯三胺，混合均匀，再加入水溶性单体，室温反应1～3小时，用0.12mol/L氯化钠水溶液清洗，得到聚合物接枝的微生物。
2.根据权利要求1所述的基于相转变溶菌酶纳米薄膜对微生物非基因改造的方法，其特征在于：所述的微生物为酵母菌、细胞、细菌中任意一种。
3.根据权利要求1所述的基于相转变溶菌酶纳米薄膜对微生物非基因改造的方法，其特征在于：所述的水溶性单体为聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯、聚N-异丙基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯中任意一种。
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