[发明专利]用于不同三维细胞团配对的装置及共培养方法

权利要求书

1.一种异种细胞团块之间1:1配对及其共培养的方法，其特征在于，所述方法采用基于微井阵列微流控芯片的装置制备不同的三维细胞团块，并使异种细胞团块之间1:1配对及共培养，

所述装置包括带有微井阵列的微流控芯片及围堰，每个微流控芯片的周边配有一个围堰，所述带有微井阵列的微流控芯片和所述围堰可拆卸地相互匹配；将所述带有微井阵列的微流控芯片及围堰均设置在细胞培养器具上；

不同的微流控芯片中微井的尺寸不同，在所述装置中至少包括两种具有不同微井尺寸的微流控芯片；当所述装置中仅包括两种微井尺寸时，将所述装置划分为第一尺寸装置和第二尺寸装置；第一尺寸装置中，微井直径为70-100μm，深度为70-120μm；第二尺寸装置中，微井直径为120-170μm，深度为180-220μm，通过在两种直径微井上分别培养不同的细胞形成三维细胞团块之后，在第一尺寸装置的微井中培养形成的细胞将形成合适大小的细胞团，在转移注入第二尺寸装置的微井之后形成异种团块之间1:1的配对；

所述方法包括以下步骤：

添加细胞的悬浮溶液：将第一种细胞悬浮溶液注入所述第一尺寸装置的围堰中，将第二种细胞悬浮溶液注入所述第二尺寸装置的围堰中；

形成团块：离心使细胞悬浮溶液中的细胞进入微井中，细胞进入微井中后在微井中形成团块，加上新鲜的培养基继续培养；

使异种团块之间进行1:1配对：将所述第一尺寸装置的微井阵列中的团块冲出来形成团块悬液，吸出所述团块悬液注入所述第二尺寸装置中，离心使所述团块悬液中的团块落入所述第二尺寸装置微井中，使两种团块实现1:1配对，加上新鲜的培养基共培养，观察两种团块的融合情况。

2.根据权利要求1所述一种异种细胞团块之间1:1配对及其共培养的方法，其特征在于，在添加细胞的悬浮溶液的步骤之前，在第一尺寸装置及第一尺寸装置的微井阵列上均孵育一层阻止细胞贴壁的物质。

3.根据权利要求1所述一种异种细胞团块之间1:1配对及其共培养的方法，其特征在于，添加细胞的悬浮溶液步骤中，所述第一种细胞悬浮溶液为成纤维细胞的悬浮液，所述第二种细胞悬浮溶液为人乳腺癌细胞的悬浮液，细胞浓度均为10⁵~10⁶个/毫升；

在形成团块的步骤中，离心的转数是700~1200转/分钟，离心时间为1分钟；加上新鲜的培养基继续培养的条件为；细胞培养箱的温度为37℃、二氧化碳体积浓度为0~10%，培养时间为24-96小时。

4.根据权利要求1所述一种异种细胞团块之间1:1配对及其共培养的方法，其特征在于，所述带有微井阵列的微流控芯片和所述围堰相互匹配时，所述带有微井阵列的微流控芯片全部在所述围堰内，所述微流控芯片外周长小于所述围堰的内周长。

5.根据权利要求1所述一种异种细胞团块之间1:1配对及其共培养的方法，其特征在于，通过将围堰和带有微井阵列的微流控芯片组合，实现可逆转的封接。

6.根据权利要求1所述一种异种细胞团块之间1:1配对及其共培养的方法，其特征在于，所述围堰用于存储染料、药物或培养基；

当使用所述围堰用于存储染料时，能够实现细胞染色；

当使用所述围堰用于存储药物时，能够实现对细胞进行药物处理及分析；

使用所述围堰用于存储培养基时，能够长期实现细胞的三维培养。

7.根据权利要求1所述一种异种细胞团块之间1:1配对及其共培养的方法，其特征在于，所述微流控芯片采用光刻技术制备，制作所述微流控芯片的原材料质为聚二甲基硅氧烷PDMS、聚苯乙烯PS、玻璃、琼脂糖、环烯烃共聚物COC或聚甲基丙烯酸甲酯PMMA高分子材料。