[发明专利]基于CRISPR/Cas9技术获得Nogo-B敲除模式小鼠的方法及应用在审
| 申请号： | 201810480921.0 | 申请日： | 2018-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN108642090A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 高利利 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军总医院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京酷爱智慧知识产权代理有限公司 11514 | 代理人： | 邹成娇 |
| 地址： | 100036*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 敲除 模式小鼠 显微注射 技术获得 基因型检测 小鼠受精卵 传统基因 体外转录 质粒载体 纯合子 小鼠 制备 突变 应用 基因 研究 | ||
1.一种基于CRISPR/Cas9技术获得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于，包括步骤：
设计高效的识别特定基因EGE-ZXH-007的sgRNA；
将所述sgRNA连入质粒载体上，然后进行体外转录，得到可进行显微注射的Cas9/sgRNA；
将所述可进行显微注射的Cas9/sgRNA显微注射到小鼠受精卵中，然后对出生的小鼠进行基因型检测和鉴定，确认最终得到Nogo-B敲除模式小鼠。
2.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas9技术获得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于：
所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas9技术获得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于：
所述质粒载体为带T7启动子的质粒载体。
4.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas9技术获得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于：
在将所述sgRNA连入质粒载体上之前，还包括Cas9/sgRNA构建和活性检测的步骤。
5.根据权利要求4所述的基于CRISPR/Cas9技术获得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于：
所述Cas9/sgRNA构建和活性检测具体包括：将所述sgRNA连入pCS载体，得到连接产物Cas9/sgRNA；将所述Cas9/sgRNA转化，然后测序验证正确；再对Cas9/sgRNA进行活性检测。
6.权利要求1-5任一项所述的方法获得的Nogo-B敲除模式小鼠在Nogo-B的功能研究中的应用。
7.一种获得Nogo-B敲除模式小鼠的试剂盒，其特征在于：
所述试剂盒包括能识别特定基因EGE-ZXH-007的sgRNA。
8.根据权利要求7所述的获得Nogo-B敲除模式小鼠的试剂盒，其特征在于：
所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
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