[发明专利]一种四倍体不结球白菜的培育方法

说明书

本发明公开了一种四倍体不结球白菜的培育方法，采用细胞微管抑制剂氨磺灵混合水溶液点滴不结球白菜幼苗的生长点，使细胞染色体加倍，苗期进行气孔鉴定，开花期进行花粉鉴定，再通过流式细胞仪鉴定，筛选获得四倍体植株。同时在氨磺灵水溶液中加入吐温80和Silwet L‑77，吐温80能够增强氨磺灵的溶解性，并提高了氨磺灵水溶液的稳定性，而Silwet L‑77能极大降低水的表面张力，利于溶液与叶面的附着，从而提高了四倍体诱变率。该方法利用氨磺灵混合水溶液抑制细胞有丝分裂后期纺锤丝的形成，从而实现染色体加倍，为创造丰富的不结球白菜四倍体新种质和培育四倍体新品种提供了技术支持。

技术领域

本发明属于遗传育种技术领域，具体涉及一种四倍体不结球白菜的培育方法。

背景技术

不结球白菜（Brassica cappestris ssp.chinensis），又名小白菜，是十字花科芸薹属植物，为一、二年生草本植物。植株较矮小，浅根系，须根发达。不结球白菜起源自我国，含有丰富矿物质和维生素。通过倍性育种可使植物基因组多倍化获得生长势旺盛、适应性强、抗逆性好的品种。四倍体是指体细胞中含有四个染色体组，经过人工诱导选育栽培，可获得优质、高产、高抗的四倍体植株。

细胞微管抑制剂氨磺灵（Oryzalin）作为秋水仙素的代替品，可以抑制有丝分裂后期纺锤丝的形成，实现染色体加倍，弥补了秋水仙素诱导存在的毒性大的弊端。但氨磺灵直接使用水溶性低，难以在叶面停留。因此有必要建立一套氨磺灵诱导不结球白菜的技术方法，为四倍体新品种的选育培育提供丰富的四倍体新种质。

发明内容

本发明的目的是提供一种四倍体不结球白菜的培育方法，采用润湿分散剂与氨磺灵配合使用，操作简便、低毒高效。

为解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

一种四倍体不结球白菜的培育方法，包括以下步骤：

步骤1，选择当年采收的饱满不结球白菜种子，按常规技术播种育苗；

步骤2，当幼苗子叶完全展开时，用氨磺灵混合水溶液早晚各点滴幼苗生长点，连续处理5次，以点滴蒸馏水作为对照；

步骤3，成株后，先进行形态学鉴定，取疑似株第5～10片真叶的下表皮，进行气孔鉴定，选择气孔显著变大的植株作为四倍体变异初选植株；

步骤4，进入开花期，取四倍体变异初选植株进行花粉鉴定，进一步筛选获得花粉显著增大变形的植株作为四倍体变异疑似株；

步骤5，取四倍体变异疑似株嫩叶进行核DNA含量流式细胞光度分析，最终确认获得四倍体植株；

所述氨磺灵混合水溶液是氨磺灵、吐温 80和有机硅表面活性剂Silwet L-77的混合水溶液。

进一步地，所述氨磺灵混合水溶液中氨磺灵的浓度为0.06-0.10mmol·L^-1。

进一步地，所述氨磺灵混合水溶液中吐温 80的浓度为0.02% v/v，有机硅表面活性剂Silwet L-77的浓度为0.02% v/v。两者浓度过低，处理效果甚微，浓度过高，则会对植株产生毒害。

进一步地，所述氨磺灵混合水溶液的配置过程如下：采用15ml乙醇溶解氨磺灵，将溶液滴加入蒸馏水中，滴加过程中不断摇匀蒸馏水，保证无药剂析出，制得浓度0.06-0.10mmol·L^-1的氨磺灵水溶液，再加入吐温 80和Silwet L-77，摇匀即得。

进一步地，步骤3中形态学鉴定，以叶片长度与宽度、叶面是否扭曲、茎粗、株高、冠幅为指标进行筛选鉴定。