[发明专利]银杏内酯的提取方法

说明书

本发明公开了银杏内酯的提取方法，包括以下步骤：1)将银杏叶粉碎，加入50～70v％乙醇回流提取，过滤，滤液调节pH值至4～5，减压浓缩，冷藏，备用；2)萃取：将冷藏液先用石油醚萃取，取水相加入乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩，干燥，得到银杏内酯粗提物；3)将银杏内酯粗提物加水搅拌，加入氯化铵，微波辐射10～30s，得到混合液；4)将混合液上D131大孔树脂柱，水洗柱至无色，然后用60～80v％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇洗脱液中的乙醇，离心，过滤，取滤渣干燥即得银杏内酯。本发明提取的银杏内酯纯度高达98％以上。

技术领域

本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种银杏内酯的提取方法。

背景技术

银杏(Ginkgo biloba L.)为银杏科银杏属多年生落叶乔木，属于中生代侏罗纪裸子植物，味甘、苦、涩，性平，归心、肺经，具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂的功效。银杏叶主要的化学成分包括黄酮类、萜内脂、聚戊烯醇和多糖类化合物。银杏萜内酯化物又称银杏叶萜内酯，由二萜内酯和倍半萜类内酯组成，目前已分离出多种萜内酯，统称为银杏内酯，主要银杏内酯有银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯M、银杏内酯J和白果内酯，它们都具有特殊立体化学结构。国外对这类成分做了大量化学、药理和临床研究，发现银杏内酯均为血小板活化因子强拮抗剂，其中银杏内酯B由于分子中醚氧与羰基氧之间的距离和血小板活化因子(PAF)中的相一致，活性最强。血小板活化因子(PAF)是由血小板和多种炎症细胞产生分泌的一种内源性磷脂，它是迄今为止发现最强的血小板聚集诱导剂，它直接参与血栓形成，与许多疾病的发生、发展密切相关。此外，银杏内酯对单一缺血损伤和中枢神经系统有保护作用，具有抗过敏、抗休克、抗器官移植排斥反应等作用。因此，银杏内酯类是银杏叶中特殊生理活性的最重要成分，具有很高的药用价值和广阔的临床应用前景。银杏内酯化合物的分子骨架由20个碳原子组成，具有6个五元环，其中有2个五元碳环、3个五元内酯环、1个四氢呋喃环，两个五元碳环以螺环的形式连接在一起，其余的环以稠合的方式连接，形成一个刚性笼状的特殊立体化学结构，具有天然产物中罕见的叔丁基。银杏内酯的复杂化学结构决定了化学合成的困难性，因此天然提取工艺将是生产银杏内酯的主要发展方向。银杏内酯含量很低，干燥叶片含量仅为0.001～0.8％，且结构独特，提取分离步骤繁琐，得率低。国外一般采用有机溶剂多级萃取与硅藻土、硅胶吸附-洗脱或活性炭吸附-洗脱与醋酸沉淀法相结合的提取方法。国内有研究学者将甲醇浸提的粗提物经氧化铝、硅胶柱、活性炭三柱分离与乙酸己酯萃取相结合的办法，最终得到90％的内酯产品，工艺应用了三种柱色谱法，加上萃取过程，非常复杂。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种银杏内酯的提取方法，该方法对设备要求简单，提取纯度高。

本发明提供的技术方案是银杏内酯的提取方法，包括以下步骤：

1)将银杏叶粉碎，加入50～70v％乙醇回流提取，过滤，滤液调节pH值至4～5，减压浓缩，冷藏，备用；

2)萃取：将冷藏液先用石油醚萃取，取水相加入乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩，干燥，得到银杏内酯粗提物；

3)将银杏内酯粗提物加水搅拌，加入银杏内酯粗提物重量1～5％的氯化铵，在微波300M～3000MHz、50～80W下辐射下10～30s，得到混合液；

4)将混合液上D131大孔树脂柱，水洗柱至无色，然后用60～80v％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇洗脱液中的乙醇，离心，过滤，取滤渣干燥即得银杏内酯。

步骤1)中，采用枸橼酸、苹果酸或山梨酸调节pH值。调节pH值是为了防止银杏内酯在碱性条件下开环，银杏内酯为5元环，在弱酸性条件下稳定。

加入抗氧化剂可以防止银杏内酯受热氧化分解。抗氧化剂为丝氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺或苏氨酸。

冷藏是为了使油水分离，去除水中脂溶性杂质。冷藏温度为1～4℃。