[发明专利]一种用于口腔鳞癌早期诊断的检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于口腔鳞癌早期诊断的检测试剂盒，特征在于，包括11种基因：MMP1、PLAU、SPP1、KRT15、NUM、IL1RN、HOPX、TGM3、KRT13、MAL、EMP1的mRNA序列的上、下游引物序列。

2.如权利要求1所述的用于口腔鳞癌早期诊断的检测试剂盒，其特征在于，还包括作为内参照的管家基因的引物。

3.如权利要求2所述的用于口腔鳞癌早期诊断的检测试剂盒，其特征在于，所述管家基因为β-actin。

4.如权利要求1-3任一所述的用于口腔鳞癌早期诊断的检测试剂盒，其特征在于，还包括：总RNA抽提试剂、和/或PCR反转录试剂、和/或PCR定量试剂。

5.如权利要求4所述的用于口腔鳞癌早期诊断的检测试剂盒，其特征在于，所述总RNA抽提试剂包括TRIzol试剂。

6.一种筛选用于口腔鳞癌早期诊断的基因或基因组合的方法，特征在于，包括以下步骤：

步骤一、筛选出口腔鳞癌相关差异表达基因，合成所述口腔鳞癌相关差异表达基因的mRNA序列的引物并制成检测试剂盒，所述口腔鳞癌相关差异表达基因包括：MMP1、PLAU、SPP1、KRT15、NUM、IL1RN、HOPX、TGM3、KRT13、MAL、EMP1；

步骤二、采集口腔鳞癌患者的肿瘤组织、正常组织成立候选组，利用步骤一制成的检测试剂盒定量检测候选组中所述口腔鳞癌相关差异表达基因的表达水平，其中检验过程中基因扩增的反应条件一致且退火温度均为60℃；

步骤三、根据所述口腔鳞癌相关差异表达基因的表达水平，采用OPLS-DA建模方法和ROC曲线分析，确定口腔鳞癌早期诊断的基因。

7.如权利要求6所述的筛选用于口腔鳞癌早期诊断的基因或基因组合的方法，其特征在于，还包括以下步骤：

步骤四、另外采集口腔鳞癌患者的肿瘤组织、正常组织成立验证组，利用步骤一制成的检测试剂盒定量检测验证组中所述口腔鳞癌早期诊断基因的表达水平，其中检验过程中基因扩增的反应条件一致且退火温度均为60℃；

步骤五、根据所述口腔鳞癌早期诊断基因的表达水平，采用OPLS-DA模型验证和ROC曲线分析，验证所述口腔鳞癌早期诊断基因在口腔鳞癌早期诊断中的准确性和稳定性。

8.如权利要求6或7所述的筛选用于口腔鳞癌早期诊断的基因或基因组合的方法，其特征在于，口腔鳞癌患者的数目大于或等于30例。

9.如权利要求6或7所述的筛选用于口腔鳞癌早期诊断的基因或基因组合的方法，其特征在于，在步骤一中，筛选所述口腔鳞癌相关差异表达基因的方法包括：对原发性口腔鳞癌肿瘤组织和配对的自体正常组织进行基因表达谱芯片检测，通过统计学方法筛选获得口腔鳞癌相关差异表达基因；和/或从与口腔鳞癌相关的基因表达谱芯片研究文献中筛选获得口腔鳞癌相关差异表达基因。

10.MMP1、PLAU、SPP1、KRT15、NUM、IL1RN、HOPX、TGM3、KRT13、MAL、EMP1基因组合在制备用于口腔鳞癌早期诊断的检测试剂盒中的应用。