[发明专利]鼠抗人IDH1 R132H突变蛋白单克隆抗体制备及其免疫组化用途

说明书

本发明公开了一种鼠抗人IDH1 R132H突变蛋白的单克隆抗体，特异性高、表现稳定且效价高，可用于检测恶性肿瘤中IDH1 R132H突变蛋白，具有一定的医学基础研究价值。本发明还涉及上述单克隆抗体在制备用于检测IDH1 R132H突变蛋白的免疫组化检测工具中的应用。本发明建立基于IDH1 R132H单克隆抗体的免疫组织化学技术，用于恶性肿瘤，主要包括神经胶质瘤和急性髓系白血病的辅助诊断、治疗方案选择和预后。鉴于免疫组化方法操作简单，收费较低，绝大部分病理实验室均可以开展，免疫组化方法可作为临床工作中IDH1 R132H基因突变的首选检测方法。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，特别涉及一种鼠抗人IDH1 R132H突变蛋白的单克隆抗体，以及该抗体的免疫组化用途。

背景技术

异柠檬酸脱氢酶1（Isocitrate dehydrogenase 1，IDH1）全长1245bp，编码414个氨基酸，属于NADP依赖型β脱羧脱氢酶家族成员，是三羧酸循环中的关键限速酶，催化异柠檬酸氧化脱羧生成α-酮戊二酸（α-KG）和二氧化碳（CO₂），为细胞新陈代谢提供能量和生物合成前体物质。IDH1突变是继发性胶质瘤诊断和预后的标志物，其中R132H最常见，占90%以上。IDH1-R132基因突变主要发生在世界卫生组织（WHO）Ⅱ-Ⅳ级的弥漫性星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、少突-星形细胞瘤、间变型星形细胞瘤、间变型少突胶质细胞瘤、间变型少突-星形细胞瘤和胶质母细胞瘤。R132是IDH1活性中心的必需氨基酸之一，由IDH1突变基因编码翻译而成的IDH1蛋白酶不仅数量减少，而且还破坏了该酶的亲和力，并与野生型IDH1竞争底物，形成二聚体，从而抑制野生型IDH1活性，使其催化异柠檬酸氧化脱羧生成α-KG和NADPH的量显著减少，导致细胞内还原产物降低，削弱了细胞内修复氧化应激所致DNA损伤的能力，同时还可导致细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）含量增加，从而激活HIF信号通路，最终促进肿瘤生长。神经胶质瘤呈浸润性生长，与正常脑组织界限不清，仅靠手术难以治愈，并且由于血脑屏障等因素的影响，化疗药物和一般抗肿瘤的中药治疗效果也不尽理想，脑胶质瘤至今仍是全身肿瘤中预后最差的肿瘤之一。研究报道IDH1 R132H突变型胶质瘤患者对化疗更敏感，生存期更长。因此，如何发现有效的胶质瘤诊治分子靶点就显得尤为重要，相关分子靶点的发现将对胶质瘤的预后预测以及对化疗药物的反应性等具有重要的科学意义和临床应用价值。

临床研究发现mIDH1 R132H分子标志物具有较高的特异性和敏感性，可用于反应性胶质增生与低级别胶质瘤的鉴别诊断。在急性髓系白血病中，IDH1 R132H也是一种经常发生的突变类型。目前，国内外研发的IDH1 R132H抗体稀少，特异性和亲和力方面均有待提高，因此亟待研发新的性能优异的抗IDH1 R132H单克隆抗体，填补国内本行业的空白，降低治疗费用，减轻病人负担。本发明研制出一种特异性高、表现稳定且效价高的抗IDH1 R132H突变蛋白的特异性单克隆抗体，可用于恶性肿瘤中IDH1 R132H突变蛋白的表达水平研究，疾病发生、进展、预后相关的病理生理研究，具有一定的医学基础研究价值。本发明采用免疫组化（IHC）方法，建立基于所述IDH1 R132H单克隆抗体的免疫组织化学技术，用于恶性肿瘤，主要包括神经胶质瘤和急性髓系白血病的辅助诊断、治疗方案选择和预后。鉴于免疫组化方法操作简单，收费较低，绝大部分病理实验室均可以开展，免疫组化方法可作为临床工作中IDH1 R132H基因突变的首选检测方法。

发明内容

基于以上所述的现有技术现状，本发明的目的为提供一种特异性好、表现稳定且效价高的抗IDH1 R132H突变蛋白的单克隆抗体，并建立基于所述IDH1 R132H单克隆抗体的免疫组织化学技术。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明所述IDH1 R132H单克隆抗体的制备方法如下：