[发明专利]一种同时区分检测Cys、Hcy和GSH多功能荧光分子探针的合成及应用

权利要求书

1.一种同时区分检测Cys、Hcy和GSH多功能荧光分子探针，其特征在于，所述的荧光分子探针的结构式如(1)所示：

（1）。

2.如权利要求1所述的一种同时区分检测Cys、Hcy和GSH多功能荧光分子探针的合成，其特征在于，所述荧光分子探针的合成方法包括以下步骤：

步骤1. 合成7-（二乙基氨基）-4-羟基色烯-2-酮

a. 将适量丙二酸二苯酯与3-二乙氨基苯酚加入无水甲苯中，加热回流反应7-9小时，

b. 待反应液冷至室温后过滤，滤饼用乙醚洗涤，所得固体真空干燥，得米黄色固体7-（二乙基氨基）-4-羟基色烯-2-酮；

步骤2. 合成7-(N,N-二乙基氨基)-4-氯香豆素-3-甲醛

．在氮气保护条件下，将适量干燥重蒸的N,N-二甲基甲酰胺（DMF）缓慢加入等体积的三氯氧磷（POCl₃）中，在20-50℃下搅拌30-60分钟，得红色溶液，

．将7-（二乙基氨基）-4-羟基色烯-2-酮溶于适量DMF中，逐滴加入到步骤的混合溶液中，混合物继续在氮气保护下60℃搅拌反应12-20小时；

．将步骤中的反应液倒入适量冰水中，用20%的NaOH溶液调节pH至5~6，产生大量沉淀，过滤，滤饼用适量去离子水洗涤3次，所得固体真空干燥，得7-(N,N-二乙基氨基)-4-氯香豆素-3-甲醛；

步骤3. 合成（E）-2-（苯并[d]噻唑-2-基）-3-（4-氯-7-（二乙基氨基）-2-氧代-2H-色烯-3-基）丙烯腈

. 将7-(N,N-二乙基氨基)-4-氯香豆素-3-甲醛和苯并噻唑-2-乙腈加入适量无水乙醇中，室温反应过夜，

. 将步骤中反应液过滤，所得固体干燥，得权利要求1所述的荧光分子探针（E）-2-（苯并[d]噻唑-2-基）-3-（4-氯-7-（二乙基氨基）-2-氧代-2H-色烯-3-基）丙烯腈。

3.如权利要求2所述的一种同时区分检测Cys、Hcy和GSH多功能荧光分子探针的合成，其特征在于，所述步骤的7-(N,N-二乙基氨基)-4-氯香豆素-3-甲醛和苯并噻唑-2-乙腈摩尔比为1:1-1.5。

4.如权利要求1所述的一种同时区分检测Cys、Hcy和GSH多功能荧光分子探针的应用，其特征在于，所述的荧光分子探针能够在血清和细胞中通过不同的反应现象与荧光信号同时区分检测Cys、Hcy和GSH的应用，可以用于不同活细胞内的Cys、Hcy和GSH荧光成像分析。