[发明专利]一种硫酸化肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺及其制备方法

权利要求书

1.一种硫酸化肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺，其特征在于，通过联用过量肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ和肝素酶Ⅲ，将天然肝素完全降解，分离制备得到天然肝素二糖，将所述肝素二糖接枝在特定分子量的聚甲基丙烯酰乙醇胺长链上，加以硫酸化，即得，所述硫酸化肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺的制备方法包括如下步骤：

(1)肝素二糖的制备与分离：首先加入过量肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ和肝素酶Ⅲ将天然肝素完全酶解；然后利用G25、强阴离子色谱交换柱分离，G10凝胶脱盐得肝素二糖；

(2)聚甲基丙烯酰乙醇胺的合成：以乙醇胺盐酸盐、甲基丙烯酰氯为原料，合成甲基丙烯酰乙醇胺单体，再利用RAFT反应制备特定分子量的聚甲基丙烯酰乙醇胺，所述特定分子量为17469；

(3)接枝反应：称取步骤(1)所得肝素二糖、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，溶于pH5.4～5.6的MES缓冲液，调节控制pH在7.5～8.5，再加入步骤(2)所得聚甲基丙烯酰乙醇胺，室温下反应8～12h，反应液离心除沉淀后，透析，冻干，得肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺；

(4)硫酸化反应：称取步骤(3)所得肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺、三氧化硫吡啶溶于超纯水中，调节pH至碱性，50～80℃反应24h，再用盐酸溶液中和，透析，冻干，即得；

所述步骤(3)中，肝素二糖与聚甲基丙烯酰乙醇胺的质量比10～20:4～5，肝素二糖、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺的质量比为1:1.25～3:0.2～1.5。

2.根据权利要求1所述的硫酸化肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺，其特征在于，所述步骤(1)中肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ和肝素酶Ⅲ的酶活添加比例为1:1:1。

3.根据权利要求1所述的硫酸化肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺，其特征在于，所述步骤(2)中甲基丙烯酰乙醇胺的合成具体步骤为：称取乙醇胺盐酸盐与对苯二酚混合，70～80℃下加入甲基丙烯酰氯，反应2h。

4.根据权利要求1所述的硫酸化肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺，其特征在于，所述步骤(2)聚甲基丙烯酰乙醇胺的合成具体步骤为：按摩尔比50～200:1:0.2称取甲基丙烯酰乙醇胺、偶氮二异丁腈和4-氰基戊酸二硫代苯甲酸，并溶于N,N-二甲基甲酰胺，70～80℃氮气保护下反应24h。

5.根据权利要求1所述的硫酸化肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺，其特征在于，所述步骤(4)中，调节pH为9.5～10.5，所用试剂为碳酸钠。

6.根据权利要求1所述的硫酸化肝素二糖接枝聚甲基丙烯酰乙醇胺，其特征在于，所述步骤(2)中，特定分子量的聚甲基丙烯酰乙醇胺为分子量单分散的组分。