[发明专利]一种转移因子胶囊的总氨基酸定量检测方法

权利要求书

1.一种转移因子胶囊的总氨基酸定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）制备总氨基酸测定衍生用供试品溶液

精密称取转移因子胶囊内容物0.9~1.2g，加入0.1mol/L盐酸溶液使转移因子被充分溶解，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜过滤，然后精密量取续滤液2.0mL，置于反应容器中，加入浓盐酸溶液6mL，充氮封口，于110℃条件下水解24h后，冷却，制得转移因子酸水解液，将转移因子酸水解液启封、水浴蒸发至干，加入0.1mol/L盐酸溶液10mL溶解残留物，制得总氨基酸测定衍生用供试品溶液；

2）制备总氨基酸含量测定供试品溶液

精密量取总氨基酸测定衍生用供试品溶液4.0mL、0.1mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液2.0mL和1mol/L三乙胺乙腈溶液1.0mL，混合后摇匀，室温下反应1h后，用8.0mL正己烷萃取，静置10min，取下层溶液用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得总氨基酸含量测定供试品溶液；

3）测定标准曲线

以谷氨酸为对照品，配制标准曲线系列溶液，并通过高效液相色谱法，得到色谱图，以谷氨酸浓度对其峰面积按最小二乘法进行线性回归，求得标准曲线方程及线性相关系数；

4）精密量取步骤2）制得的总氨基酸含量测定供试品溶液2μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，得到总氨基酸含量测定供试品溶液中以谷氨酸为内参物，以相对保留时间定位的18种氨基酸色谱峰，将各色谱峰的面积代入标准曲线方程中求出各氨基酸含量，并乘以各氨基酸相对于谷氨酸的相对校正因子，再求和计算出转移因子胶囊中总氨基酸含量；

步骤1）中，转移因子酸水解液中含总氨基酸1.6~2.4mg/mL；步骤2）中，总氨基酸含量测定供试品溶液中含总氨基酸0.4~0.8mg/mL；步骤2）中，下层溶液用0.22~0.45μm微孔滤膜过滤；

步骤4）中，各氨基酸相对于谷氨酸的相对校正因子，是以谷氨酸为内参物，采用标准曲线法测得；

总氨基酸含量测定供试品溶液中18种氨基酸的相对保留时间检测结果如下：

；

步骤3）和步骤4）中，高效液相色谱检测条件为：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

梯度洗脱所用流动相为：

流动相A：按甲醇：乙腈：水=20：60：20的体积比配成的溶液；

流动相B：按醋酸钠缓冲溶液：流动相A=97:3的体积比配成的溶液；

醋酸钠缓冲溶液浓度为0.1mol/L，pH值为6.0~6.5；

检测波长：210~320nm；

进样量为1~10μL；

流速为0.5~2mL/min；

柱温为25~50℃;

梯度洗脱时，流动相A与流动相B的变化比例如下：

0min，流动相B ：100%；

15min，流动相A：14%、流动相B：86%；

20min，流动相A：17%、流动相B：83%；

50min，流动相A：44%、流动相B：56%；

50.1min，流动相A：100%；

55min，流动相B ：100%；

65min，流动相B ：100%。

2.根据权利要求1所述的转移因子胶囊的总氨基酸定量检测方法，其特征在于，十八烷基硅烷键合硅胶的粒度为5~10μm；色谱柱的内径为2~5mm，长度为10cm~30cm。