[发明专利]利用全景细胞多维系统检测水体镉离子的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用全景细胞多维系统检测水体镉离子的方法，其特征在于，按照下述步骤进行：

步骤1，调整Datko培养基的PH至5.6～5.8，于100～105kPa、120～125℃下进行灭菌；所述Datko培养基如下：

步骤2，将Cd²⁺加入到步骤1得到的Datko培养基上，得到含镉Datko培养基；

步骤3，采集浮萍，将浮萍培养于步骤2得到的含镉Datko培养基上，培养24小时，得到浮萍植株，其中，培养条件为：温度18～25℃，光周期16～18小时/天，光强95～97μmol m^-2s^-1；

步骤4，夹取步骤3得到的浮萍植株，用A液清洗后，将所述浮萍植株放入离心管中，加入组织固定液固定所述浮萍植株15～20min；其中，所述组织固定液如下：

乙醇水溶液 85～95g/l

冰醋酸 95～100g/l

去离子水 溶剂，

其中，在所述乙醇水溶液中，乙醇的体积浓度为80～90％；

所述A液如下：

步骤5，在酶解温度为23～27℃的条件下，用组织酶解液在黑暗条件下酶解步骤4所得的浮萍植株25～30min，每间隔10～15min吹打混匀一次，得到悬浮的浮萍原生质体；所述组织酶解液如下：

步骤6，通过离心对步骤5所得的浮萍原生质体清洗2～5次，每次清洗的过程为：用20～25℃的B液垂直打入浮萍原生质体所在离心管，以使浮萍原生质体悬浮，悬浮后进行离心，离心后移除上层清液；

所述B液如下：

步骤7，对浮萍原生质体清洗后，用B液重悬浮萍原生质体，并用移液枪吹打均匀；吹打均匀后，滴20μl Green AM，在黑暗条件下，于37～40℃染色15～20min；

步骤8，按照步骤6所述清洗的过程清洗步骤7得到的浮萍原生质体2～5次；

步骤9，利用全景细胞多维系统分析检测，通过荧光对镉离子进行定位分析，根据荧光强度分析镉离子含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤1之前，制备Datko培养基母液，通过对所述Datko培养基母液进行稀释得到所述Datko培养基。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述B液的PH为7～8。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在所述步骤1中，灭菌时间为20～25分钟。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述步骤3中，所述A液的PH为7～8。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述步骤6中，每次清洗3～5min，相对离心加速度或相对离心力为2000～2500×g。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述Datko培养基如下：

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，组织固定液如下：

乙醇水溶液 90g/l

冰醋酸 98g/l

去离子水 溶剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，组织酶解液如下：

10.如权利要求1～9中任意一项所述方法在定位、检测和跟踪镉离子中的应用。