[发明专利]玫烟色棒束孢IF-1106菌株液体发酵优化工艺

说明书

本发明涉及玫烟色棒束孢IF‑1106菌株液体发酵优化工艺，发酵步骤如下：步骤一、取出玫烟色棒束孢IF‑1106菌株活化，接种在PDA培养基上，在25℃的霉菌培养箱中培养；步骤二、每50ml液体培养基包含MgSO₄·7H₂O:0.5g、KCl:0.5g、KH₂PO₄:1.0g、FeSO₄·7H₂O:0.1g、蔗糖和蛋白胨，其中蔗糖浓度为4.3％，蛋白胨浓度为0.7％；步骤三、将菌株培养10d后，加入含0.1％的吐温80无菌水，制成孢子悬浮液，浓度调节为1×10⁷孢子/ml；步骤四、在培养皿中加入液体培养基灭菌后，在无菌条件下按照15％体积比的接种量，接入孢子悬浮液，在温度为20～30℃、摇床转速为150r/min的全黑暗条件下发酵培养6～7d。本发明为玫烟色棒束孢IF‑1106菌株的大规模生产及产业化应用奠定基础，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及微生物液体发酵工艺领域，具体的说是玫烟色棒束孢IF-1106菌株液体发酵优化工艺。

背景技术

玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)，属于半知菌亚门(Deuteromycotian)、丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(Moniliales)、丛梗孢科(Moniliaceae)、棒束孢属(Isaria)，是一种重要的昆虫病原真菌，地理分布广泛，对多种农林害虫具有侵染作用，能侵染烟粉虱(Bemisia tabaci)、温室白粉虱(Aleurodes vaporariorum)、小菜蛾(Plutellaxyllostella)、菜青虫(Pierisrapae linne)、柑橘木虱(Diaphorina dtri)等多种农林害虫。

山西农业大学在田间分离到了一株玫烟色棒束孢菌株，命名为IF-1106，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2013年4月23日，保藏编号CGMCCNo.7514。通过初步实验证明该菌对烟粉虱等害虫有较高的致病力，因此希望用该菌来防治此类害虫。据白僵菌有关培养条件及其与毒力关系的研究(李农昌、樊美珍、李春如等.安徽农业大学学报,1996,23(3):254-259)报道，培养条件对菌株的产孢量及致病力均有较大影响，且产孢量是我们筛选优良菌株的重要指标。此外，不同菌株的生物学特性之间有所差异。因此，了解影响该玫烟色棒束孢菌株菌落生长及产孢的环境因子，是利用该菌防治害虫的基础。

发明内容

本发明的目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种产孢量大的玫烟色棒束孢IF-1106菌株液体发酵优化工艺。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案是：玫烟色棒束孢IF-1106菌株液体发酵优化工艺，发酵步骤如下：

步骤一、取出玫烟色棒束孢IF-1106菌株活化，接种在PDA培养基上，在25℃的霉菌培养箱中恒温培养；

步骤二、制备液体培养基，每50ml液体培养基包含MgSO₄·7H₂O:0.5g、KCl:0.5g、KH₂PO₄:1.0g、FeSO₄·7H₂O:0.1g、蔗糖和蛋白胨，其中控制蔗糖浓度为4.3％，蛋白胨浓度为0.7％；

步骤三、将步骤一中玫烟色棒束孢IF-1106菌株培养10d后，加入含0.1％的吐温80无菌水，制成孢子悬浮液，浓度调节为1×10⁷孢子/ml；

步骤四、在培养皿中加入步骤二中的液体培养基灭菌后，在无菌条件下按照15％体积比的接种量，接入步骤三中的玫烟色棒束孢IF-1106菌株的孢子悬浮液，在温度为20～30℃、摇床转速为150r/min的全黑暗条件下发酵培养6～7d。

优选地，所述步骤四中培养温度为25℃。