[发明专利]一种高含量喷司他丁蛹虫草菌株的培养方法

说明书

本发明公开了一种高含量喷司他丁蛹虫草菌株的培养方法，其驯化步骤分为：1)、蛹虫草菌株初步训化、复壮；2)、菌种c发酵培养：3)、有机硒培养基制备：4)、高喷司他丁蚕蛹虫草制备。本发明的目的在于解决虫草菌种能够适应高浓度含量葡萄糖酸锰的培养环境中生长，所加入的有机锰为富锰虫草菌丝体，增加了成品的锰含量，加入无机锰，刺激蛹虫草产生更多喷司他丁。

技术领域

本发明涉及食用菌栽培技术领域，具体是一种高含量喷司他丁蛹虫草菌株的培养方法。

背景技术

蛹虫草为子囊菌门，肉座目，虫草菌科、虫草属的模式种。学名为Cordycepsmilitaris，又名北冬虫夏草、北虫草等，有部分地区亦称为踊虫草，世界性分布，天然资源数量很少。 1950年，德国科学家Cunningham观察到被蛹虫草寄生的昆虫组织不易腐烂，进而从中分离出一种抗菌性物质，3’-脱氧腺苷，定名为虫草素。由子座(即草部分，又称子实体) 与菌核(即昆虫的尸体部分)两部分组成的复合体。多感染鳞翅目昆虫的蛹。

喷司他丁为白色结晶，最早由Woo等在1974年从Streptomyces antiboticus培养液中分离得到。喷司他丁为一种极强的腺苷脱氨酶(ADA)抑制剂。ADA是一种参与嘌呤救援代谢途径的酶，可使腺苷脱氨变成次黄苷，此酶为淋巴细胞正常功能所必需。本品与ADA的亲和力很高，可与ADA紧密结合，抑制ADA的活性，使细胞脱氧腺苷三磷酸(dATP)水平增高，dATP通过抑制核糖核苷酸还原酶阻断DAN合成。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高含量喷司他丁蛹虫草菌株的培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种高含量喷司他丁蛹虫草菌株的培养方法，其驯化步骤如下：

1)、蛹虫草菌株初步训化、复壮：

将栽培种接种在葡萄糖酸锰含量为0.057mmol/L的液体培养基内培养，静置48小时后，每天摇瓶2次，每次5分钟，96小时后连续摇瓶18小时，即得到蛹虫草菌株a，将所述蛹虫草菌株a注入健壮的柞蚕蛹体内进行复壮培养，注菌后暗室培养，待发菌完毕，转入400-600lx光照下培育，得到蛹虫草子实体，将蛹虫草子实体进行组织分离，得到菌种b，其组织分离培养基含有X浓度葡萄糖酸锰，将菌种b经过两次传代获得菌种c，每次传代都用含X浓度葡萄糖酸锰培养基，每一试管斜面培养基菌种可以传代30管菌种；

2)、菌种c发酵培养：

将菌种c接种在发酵罐中，其中含X浓度葡萄糖酸锰，经过5天发酵培养，收集菌丝体d，用饮用水反复冲洗后，50℃低温真空干燥；

3)、有机硒培养基制备：

将干燥的菌丝体d超微粉碎，加入10倍量的纯化水，300W超声提取30分钟，过滤，滤渣直接加入基础液体培养基中，每升中加入10g超微粉的滤渣，滤液在无菌操作下，加入灭菌后的液体培养基中，然后向液体培养基中加入葡萄糖酸锰，葡萄糖酸锰加入量与菌丝体d重量比为1∶1，每升中加入80-100ml滤液和8-10g葡萄糖酸锰，既得培养基z；

4)、高喷司他丁蚕蛹虫草制备：

将菌种c接种培养基z中，培养基中锰摩尔浓度0.116-0.173mmol/L，静置48小时后，每天摇瓶2次，每次5分钟，96小时后连续摇瓶18小时，即得菌种e，将所述蛹虫草菌种e注入消过毒的健壮柞蚕蛹体内，得到的蛹虫草子实体f，所述蛹虫草子实体f为最终的高喷司他丁蛹虫草。