[发明专利]一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用。本发明利用溶藻弧菌噬菌体Vp670和海藻糖等辅剂，开发相应的噬菌体制剂，该噬菌体制剂施用后，会长期持续存在于水体环境中，保持致病的宿主菌与噬菌体数量的平衡，因此，与抗生素相比效果持久、使用量小。本发明的噬菌体Vp670制剂没有毒副作用，是一种新型绿色的生物消毒制剂，可用于海水养殖动物溶藻弧菌感染防控，促进水产养殖业的健康发展。

技术领域

本发明涉及水产养殖技术领域，具体涉及一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用。

背景技术

细菌性疾病一直困扰着水产养殖业的发展，其中由致病溶藻弧菌爆发引起的流行性疾病对水产养殖业造成巨大经济损失。治疗溶藻弧菌和其他致病菌的常用方法是使用各种抗生素，但在水产养殖中使用抗生素不仅引起食品安全问题，也会引起一系列环境生态问题，包括海洋环境中大量耐药菌的出现以及耐药基因的传播。据统计从海水中分离的大约90％的细菌具有至少一种抗生素抗性，而且大约20％的细菌对于至少5种抗生素具有抗性。因此，急需研制新型抗菌制剂来解决上述问题。

噬菌体是一类以细菌为宿主的病毒，又称细菌病毒，广泛存在于自然界中，它分为烈性噬菌体以及温和噬菌体。烈性噬菌体可在敏感宿主菌内增殖，并使之裂解，也称毒性噬菌体。温和噬菌体基因组整合于宿主菌基因组中，成为细菌DNA的一部分，和宿主核酸同步复制，宿主细胞不裂解而继续生长。其中，由于烈性噬菌体具有天然的裂菌特性且具有专一性，被认为是一种安全、非常有潜力的生物杀菌剂，近几年由于超级耐药菌的出现以及抗生素的副作用报道增多，噬菌体的研究再次受到重视。

噬菌体的专一性和其快速增殖的特点促使其成为治疗细菌性疾病的有力工具。首先，噬菌体的治疗具有特异性，可以针对某一特定有害细菌菌株有选择性的杀灭，从而使生物体内或其生活环境的正常菌群平衡受到最小程度的影响，相比抗生素，其对环境毒副作用小，也保证了食品安全；其次，噬菌体可以随宿主菌的增殖而增殖，并在细菌感染的整个过程中发挥作用，而不像抗生素那样随时间的推移疗效逐渐降低；第三，噬菌体制剂获取方便，价格低廉。目前噬菌体制剂已经受到许多生物技术公司的重视，国外已经有噬菌体药物出现，但噬菌体制剂在水产养殖中的应用还在起步阶段，市场中并未见有水产噬菌体制剂开发，因此噬菌体制剂的应用具有很大的发展潜力。

前期工作中，我们已经获得到了噬菌体Vp670，又名ΦPE333，但并未进行感染能力研究和制剂开发，也未指出其应用途径。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用，该噬菌体制剂具有专一裂解溶藻弧菌的特性，能够特异高效杀灭养殖水体和养殖动物体内的溶藻弧菌，从而起到防治水产动物的作用，不破坏水环境中的其他菌群，不会对养殖动物以及消费者产生任何影响，且能够长期存在水体环境中，保持致病宿主菌与噬菌体数量的平衡。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种溶藻弧菌噬菌体制剂，包括噬菌体Vp670和辅剂，所述辅剂包括海藻糖

上述技术方案中的制剂以噬菌体Vp670作为裂解溶藻弧菌的有效成分，具有专一裂解溶藻弧菌的特性，不破坏水环境中的其他菌群，不会对养殖动物以及消费者产生任何影响，且能够长期存在水体环境中，保持致病宿主菌与噬菌体数量的平衡。

本发明还提供了一种上述溶藻弧菌噬菌体的制备方法，包括以下步骤：

(1)将溶藻弧菌菌液与噬菌体Vp670培养液混合，形成混合培养液，摇动培养4～6h；

(2)在步骤(1)中的混合培养液加入氯仿，氯仿与混合培养液的体积比为0.05％～0.1％，摇动培养10～15min后；

(3)过滤培养液；

(4)在步骤(3)的滤液中加入海藻糖，充分混匀，海藻糖与滤液的质量比为0.2％～0.4％，得到所述的噬菌体制剂。