[发明专利]枯草芽孢杆菌糖基转移酶及其应用

权利要求书

1.一种糖基化方法，所述方法包括：在糖基转移酶BsUGT1的存在下，使达玛烷型四环三萜类化合物的C3、C12和/或C20位上的羟基糖基化，其中，所述糖基转移酶BsUGT1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述达玛烷型四环三萜类化合物为达玛烷型人参皂苷前体或达玛烷型人参皂苷；所述达玛烷型人参皂苷前体为达玛烯二醇-II(DM)、原人参二醇(PPD)或原人参三醇(PPT)；所述达玛烷型人参皂苷为Compound K、12β-O-Glc-PPD、12β-O-Glc-PPT、Rh2或3β-O-Glc-PPT。

3.一种稀有人参皂苷的生产方法，其特征在于，所述方法包括：在糖基供体的存在下，使用糖基转移酶BsUGT1催化下述一种或多种反应，以生产稀有人参皂苷，其中，所述糖基转移酶BsUGT1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

其中，R¹和R²为H或羟基基团，R³为H或糖基，R⁴为糖基；

其中，R¹为H或羟基基团，R²和R³相同或不同，各自独立地为糖基；

其中，R¹和R³相同或不同，各自独立地为糖基，R²为H或羟基基团；

其中，R¹为H或羟基，R²和R³相同或不同，各自独立地为糖基；

其中，R¹和R²相同或不同，各自独立地为糖基；或者

其中，R¹和R²相同或不同，各自独立地为糖基。

4.根据权利要求3的生产方法，其特征在于，所述糖基包括葡萄糖糖基、鼠李糖糖基、半乳糖糖基、乙酰基葡萄糖糖基、阿拉伯呋喃糖糖基、阿拉伯吡喃糖糖基或木糖糖基。

5.根据权利要求3的生产方法，其特征在于，

当式(2)的化合物为达玛烯二醇-II，式(3)的化合物为3β-O-Glc-DM；

当式(2)的化合物为原人参二醇，式(3)的化合物为3β-O-Glc-PPD；

当式(2)的化合物为原人参三醇，式(3)的化合物为3β-O-Glc-PPT；

当式(2)的化合物为Compound K，式(3)的化合物为3β,20S-Di-O-Glc-PPD；

当式(4)的化合物为12β-O-Glc-PPD，式(5)的化合物为3β,12β-Di-O-Glc-PPD；

当式(4)的化合物为12β-O-Glc-PPT，式(5)的化合物为3β,12β-Di-O-Glc-PPT；

当式(6)的化合物为Rh2，式(7)的化合物为3β,12β-Di-O-Glc-PPD；

当式(6)的化合物为3β-O-Glc-PPT，式(7)的化合物为3β,12β-Di-O-Glc-PPT；

当式(8)的化合物为原人参二醇，式(9)的化合物为3β,12β-Di-O-Glc-PPD；

当式(8)的化合物为原人参三醇，式(9)的化合物为3β,12β-Di-O-Glc-PPT；

当式(10)的化合物为达玛烯二醇-II，式(11)的化合物为3β,20S-Di-O-Glc-DM；或者

当式(12)的化合物为20S-O-Glc-DM，式(13)的化合物为3β,20S-Di-O-Glc-DM。

6.糖基转移酶BsUGT1在生产稀有人参皂苷中的应用，其中，所述糖基转移酶BsUGT1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述稀有人参皂苷选自：3β-O-Glc-DM、3β-O-Glc-PPD、3β-O-Glc-PPT、3β,20S-Di-O-Glc-PPD、3β,12β-Di-O-Glc-PPD、3β,12β-Di-O-Glc-PPT或3β,20S-Di-O-Glc-DM。