[发明专利]一种与辣椒果实朝向紧密关联的SNP位点及其通用性分子标记、获取方法和应用

权利要求书

1.分子标记CaUP12在鉴定辣椒果实朝向中的应用，所述的应用方法具体包括如下步骤：

（1）以辣椒基因组DNA为模板，采用分子标记CaUP12进行PCR扩增，所述的分子标记为正向引物CaUP12-F和反向引物CaUP12-R，其正向引物序列为SEQ ID NO.1，反向引物序列为SEQ ID NO.2；

（2）对PCR产物进行PCR-RFLP限制酶MspI酶切，并利用1%的琼脂糖凝胶对酶切产物进行凝胶电泳；

（3）检测PCR-RFLP反应酶切产物，如果出现2个特异条带，且2个条带大小分别为445bp、222 bp时，可判断辣椒材料为纯合的果实朝上材料；如果只出现1个特异条带，且条带大小为667 bp时，可判断所测试辣椒材料为纯合的果实朝下材料；如果同时出现三个条带，且3个条带大小分别为667 bp、445 bp和222 bp时，则可判断所测试辣椒材料为杂合的果实朝下的材料。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的PCR扩增反应体系，按总体积为20 μl计，包括如下各组分：

正向引物 0.4 μl

反向引物 0.4 μl

10×PCR Buffer 2.0 μl

dNTPs 0.4 μl

Taq DNA聚合酶 0.2 μl

DNA模板 1.0 μl

ddH₂O 补足20 μl。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的PCR扩增反应条件为：95.0℃预变性3 min；95.0℃变性30 s，56.0℃复性30 s，72.0℃延伸45s，设置循环，跳至95℃，30s，循环32次；72.0℃延伸5 min，4℃保存。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的酶切体系如下：

PCR反应产物 10 μl

10×Buffer Tango 2 μl

MspI 1 μl

ddH₂O 补足31 μl。