[发明专利]一种体外培养脑肿瘤细胞的培养液及培养方法

权利要求书

1.一种体外培养脑肿瘤细胞的培养液，其特征在于：所述的培养液包括神经细胞基础培养基、添加质量为所述的神经细胞基础培养基质量的0.5%~5%的B27营养因子、添加质量为所述的神经细胞基础培养基质量的0.5%~5%的双抗-青霉素/链霉素、添加质量为所述的神经细胞基础培养基质量的0.5%~5%的谷氨酰胺、添加质量为所述的神经细胞基础培养基质量的0.5%~5%的丙酮酸钠、添加质量为所述的神经细胞基础培养基质量的0.5%~1.5%的胎牛血清、重组Shh蛋白；其中，所述的重组Shh蛋白的添加量为每1 mL所述的神经细胞基础培养基加入2.5 μ g~3.5 μg。

2.根据权利要求1所述的体外培养脑肿瘤细胞的培养液，其特征在于：所述的重组Shh蛋白的添加量为每1 mL所述的神经细胞基础培养基加入2.8μg~3.2μg。

3.根据权利要求1所述的体外培养脑肿瘤细胞的培养液，其特征在于：所述的胎牛血清的添加质量为所述的神经细胞基础培养基质量的0.8%~1.2%。

4.一种如权利要求1至3中任一项所述的培养液在脑肿瘤细胞的体外培养中的应用；所述的脑肿瘤细胞为髓母细胞瘤细胞。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的体外培养的方法为悬浮培养。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的脑肿瘤细胞在所述的培养液中的细胞接种密度为3×10⁵~5×10⁵个/mL。

7.一种脑肿瘤细胞的体外培养方法，其特征在于：将处理后的脑肿瘤细胞接种至权利要求1至3中任一项所述的培养液中进行悬浮培养；所述的脑肿瘤细胞为髓母细胞瘤细胞。

8.根据权利要求7所述的脑肿瘤细胞的体外培养方法，其特征在于：所述的处理后的脑肿瘤细胞的制备方法为：将从小鼠小脑中提取的髓母细胞瘤组织在36℃~38℃下采用消化液消化20~40min，然后用胰酶抑制剂终止消化，然后经滤膜过滤，离心后获得所述的处理后的脑肿瘤细胞,其中，每10mL所述的消化液中的成分如下：90U~110U的木瓜蛋白酶、1mg~3mg的半胱氨酸以及2400U~2600 U的DNA酶。