[发明专利]多聚半乳糖醛酸酶及其突变体TePG28b_N85E/S86W和应用

说明书

本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及多聚半乳糖醛酸酶及其突变体TePG28b_N85E/S86W和应用。所述多聚半乳糖醛酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1，将该酶的第85位的天冬酰胺突变成谷氨酸和第86位的丝氨酸突变成色氨酸获得所述突变体。本发明提供了一个新的高催化效率多聚半乳糖醛酸酶突变体，可作应用于饲料、食品、纺织等工业。

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及多聚半乳糖醛酸酶及其突变体TePG28b_N85E/S86W和应用。

背景技术

果胶酶(pectinase)是指能分解果胶类物质的一类酶的总称，广泛分布于高等植物和微生物。果胶酶一般分为四大类：果胶水解酶，果胶裂解酶和果胶酯酶和原果胶酶等。果胶酶在食品应用中非常广泛，如果汁澄清，提高果蔬出汁率，改善酒的色泽品质，增加酒的香气。此外，果胶酶在纺织，饲料发酵和洗涤等行业有重要作用。果汁出汁方面，果胶酶可分解植物细胞壁上的多聚糖类基质，使果蔬汁自流量增加，也可以将果胶分解成果胶酸小分子物质，或者控制果汁中的浸渍作用、脱去果胶，软化果肉组织,降低粘度，改善压榨性能，提高果蔬的出汁率。纺织工艺方面，有研究发果胶酶预处理可以除去部分覆盖在纤维表面的抽出物,从而暴露出更多的碳水化合物和木素,提高其后过氧化氢漂白的效果，并且，纸张的性能也得到了很明显的改善。在饲料行业，果胶酶可提高肉鸡肠道消化酶的活性，改善空肠组织形态，提高其营养物质消化率。

天然果胶酶来源于动植物，但产量低，提取困难且成本高，不满足实验和生产的需求，微生物因具有生长条件简单、生长速度快，代谢过程特殊和分布广，纯化简单等特点而成为果胶酶的重要来源。因此利用微生物开发、挖掘和研究优质的果胶酶资源具有很大的经济意义，本发明通过分子改良手段，对多聚半乳糖醛酸酶进行改造，获得高比活、高催化效率突变菌株，为其他酶类提高催化效率方面分子改良也提供了依据。

发明内容

本发明提供了一种多聚半乳糖醛酸酶，并进一步将野生型T3loop区上第85位的天冬酰胺突变成谷氨酸和第86位的丝氨酸突变成色氨酸从而获得高催化效率的突变体。

本发明的目的是提供一种高催化效率多聚半乳糖醛酸酶突变体。

本发明的再一目的是提供编码上述多聚半乳糖醛酸酶突变体的基因。

本发明的另一目的是提供包含上述突变体基因的重组载体。

本发明的另一目的是提供包含上述突变体基因的重组菌株。

根据本发明的母本多聚半乳糖醛酸酶所述氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

根据本发明的高催化效率多聚半乳糖醛酸酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供编码上述多聚半乳糖醛酸酶的基因。

本发明还提供编码上述多聚半乳糖醛酸酶突变体的基因。

本发明还提供了包含上述多聚半乳糖醛酸酶基因或多聚半乳糖醛酸酶突变体基因的重组载体。

本发明还提供了包含上述多聚半乳糖醛酸酶基因或多聚半乳糖醛酸酶突变体基因的重组菌株。

本发明还提供了一种制备高催化效率多聚半乳糖醛酸酶突变体的方法，包括以下步骤：

1)用上述的重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；

2)培养重组菌株，诱导重组多聚半乳糖醛酸酶表达；

3)回收并纯化所表达的高催化效率多聚半乳糖醛酸酶N85E/S86W；