[发明专利]一种透明质酸纳米抗体、其编码序列及其用途

说明书

本发明公开了一种透明质酸纳米抗体、其编码序列及其用途，其中透明质酸纳米抗体是针对透明质酸表位的纳米抗体，包括具有SEQ ID 15或SEQ ID 16所示氨基酸序列的VHH链。本发明透明质酸纳米抗体具有非常高的亲和力，这种高亲和力特性赋予了该纳米抗体在检测透明质酸时的高灵敏度，使其具有更小的最低检测限与最低定量限，从而可以采用竞争法ELISA和夹心法ELISA的原理更优地应用于临床上血清中透明质酸的检测。

技术领域

本发明涉及一种透明质酸纳米抗体、其编码序列及其用途，属于生物医学或生物制药技术领域。

背景技术

肝纤维化是目前全世界发病率与死亡率居高不下的主要原因之一。肝星形细胞的激活和异常增殖导致细胞外基质成分的大量分泌和累积，例如III型前胶原肽(PIIINP)、透明质酸(HA)、IV型胶原(CIV)、VI型胶原(CVI)、粗纤维调节素(CXIV，Undulin)、层粘素(LN)、细胞粘合素C(Tenascin)等，是最终导致进展性肝纤维化的主要原因之一。几乎所有的肝脏疾病，特别是乙型肝炎、丙型肝炎、酒精性肝病、自身免疫性或遗传性肝病等常见高发肝脏疾病，都会逐渐发展为进展性肝纤维化，最终发展为肝硬化。

肝纤维化是由慢性肝损伤导致的细胞外基质的大量分泌和累积而引发的，这种累积是可逆性的，临床上一般观察不到致死性结节形成；而肝硬化则是细胞外基质大量分泌和累积到一定程度后，围绕肝实质细胞形成大量坏死性结节，其病理过程不可逆。因此，对任何肝脏疾病的预防和治疗的主要临床需要之一，便是要及早进行早期诊断和监测，防治可逆性的肝纤维化逐渐转变为不可逆的肝硬化。

肝脏组织活检仍然是目前诊断肝纤维化的主要的和可靠的手段之一，被认为是肝脏纤维化诊断的“金标准”。然而，肝活检是一种创伤性操作，患者依从性差，存在可能的并发症，难以动态观察和重复进行，并且不能有效地进行定量评价。因此，肝纤维化的无创血清学诊断是组织活检的一种有益的补充和替代检测方法。

目前，在肝纤维化血清学检测中，常见的肝纤维化生物标志物有透明质酸(HA)、III型前胶原肽(PIIINP)、IV型胶原(CIV)、VI型胶原(C VI)、粗纤维调节素(CXIV，Undulin)、层粘素(LN)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子(TGF)、细胞粘合素C(Tenascin)、基质金属蛋白酶及抑制剂复合物(MMP-2/MMP-9/TIMP-1)等。透明质酸(HA)是一种细胞外基质型糖胺多糖，临床上检测透明质酸的方法主要有：(1)基于¹²⁵I标记的透明质酸结合蛋白(HABP)，采用放射免疫分析方法(RIA)；由于¹²⁵I标记的HABP有效期短(45天)，导致成本居高不下，且该方法的建立技术要求高，成本高，不易推广；(2)基于透明质酸结合蛋白(HABP)及酶偶联的抗HABP抗体的间接酶联免疫方法(ELISA)；(3)直接基于抗透明质酸的单克隆抗体，开发的间接竞争型酶联免疫方法(ELISA)等(CN102010469B)。虽然上述技术方法的灵敏度能够达到ng级，但其由于需要放射性标记或制备单克隆抗体，所需成本较高，而且其检测方法的特异性和鲁棒性不强，最低检测限仍然偏高。目前，透明质酸的临床血清学检测仍然需要最低检测限与最低定量限在亚ng级的定量检测方法，仍然需要特异性和鲁棒性更优的定量检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种透明质酸纳米抗体、其编码序列及其用途。本发明提供的透明质酸纳米抗体具有非常高的亲和力，这种高亲和力特性赋予了该纳米抗体在检测透明质酸时的高灵敏度，使其具有更小的最低检测限与最低定量限，从而可以基于夹心法原理和竞争法原理建立固相酶联免疫法(ELISA)更优地应用于临床上血清中透明质酸的检测。