[发明专利]Let-7i的抑制剂在制备治疗心肌缺血损伤的药物中的应用

说明书

本发明属于基因的功能与应用领域，公开了Let‑7i的抑制剂在制备治疗心肌缺血损伤的药物中的应用。本发明确定了Let‑7i与心肌细胞细胞周期的相互关系，从而首次将Let‑7i作为药物靶标用于制备治疗心肌缺血损伤的药物，特别是用于制备促进心肌再生治疗心肌缺血损伤的药物，进而提供一种治疗心肌缺血损伤的药物，即针对Let‑7i的腺相关病毒。

技术领域

本发明属于基因的功能与应用领域，涉及一种参与细胞周期的microRNA（简称miRNA）Let-7i的应用，特别涉及Let-7i的抑制剂在制备治疗心肌缺血损伤的药物中的应用。

背景技术

人类左心室包含了20-40亿个心肌细胞，而一次心肌梗死在几小时内就可以丢掉5-10亿的心肌细胞。随着人体的衰老，大约每年会丢失约2000万个心肌细胞。各种心脏疾病的终末阶段——心力衰竭也是以心肌细胞的丢失、残留心肌细胞的功能恶化为主要特征。心脏移植因其供体来源有限也只能使极少数患者获益。因此，促进心肌细胞的再生，恢复有功能的心肌细胞数量，从根本上修复损伤的心肌组织就称为了亟待发展的治疗策略。事实上，已有研究证明，通过基因干预是促进已存在的心肌细胞重新进入细胞周期以实现心肌再生的有效策略之一。

Let-7i是 Let-7 家族成员，在心肌细胞中高表达。既往研究提示，Let-7i具有强大的肿瘤抑制作用，通过调控细胞周期进而影响肿瘤的生长。Ana Eulalio等在体外实验中发现，Let-7i的表达量随着小鼠年龄的增加而相应地增加，伴随着心肌再生能力的逐渐减弱；有趣地是，在体外敲低小鼠心肌细胞的Let-7i的表达量后观察到相关心肌再生的荧光指标增多（A. Eulalio et al., Functional screening identifies miRNAs inducingcardiac regeneration. Nature 492, 376-381 (2012).）。然而，Let-7i是否在生物体内仍然具有相同的抑制心肌再生的功能尚不清楚。

发明内容

本发明的目的在于提供一种参与细胞周期的microRNA（简称miRNA）Let-7i的应用。

本发明所述的应用是Let-7i的抑制剂在制备治疗心肌缺血损伤的药物中的应用。

进一步，本发明所述的应用是Let-7i的抑制剂在制备促进心肌再生治疗心肌缺血损伤的药物中的应用。

根据本发明所述的应用的进一步特征，所述治疗心肌缺血损伤的药物是针对Let-7i的腺相关病毒。

通过基因干预，促进已存在的心肌细胞在此进入细胞循环是实现心肌再生的策略之一，但目前因心肌细胞细胞周期的调控机制不明确而缺乏有效的治疗手段。本发明确定了Let-7i与心肌细胞细胞周期的相互关系，从而首次将Let-7i作为药物靶标用于筛选治疗心肌缺血损伤的药物，特别是用于制备促进心肌再生治疗心肌缺血损伤的药物，进而提供一种治疗心肌缺血损伤的药物，即针对Let-7i的腺相关病毒。

本发明利用Realtime PCR技术在体外实验中证实，Let-7i的表达量随着小鼠鼠龄的增加而增加。接着，在体内注射腺相关病毒（AAV-anti-Let-7i or AAV-NC）至28天龄成年小鼠左心室以抑制Let-7i的表达，通过EdU免疫荧光的阳性染色率观察心肌细胞增殖情况，结果提示抑制Let-7i表达可促进心肌细胞增殖。最后，以抑制Let-7i腺相关病毒感染C57成年小鼠为实验对象（AAV-anti-Let-7i or AAV-NC），通过结扎左冠状动脉前降支建立小鼠心肌梗死模型，结果表明与空病毒组相比，抑制Let-7i腺相关病毒感染C57小鼠心肌细胞增殖明显增多，细胞凋亡明显减轻，心梗面积明显减少，心室重构和心功能明显改善。这些结果提示Let-7i具有阻滞心肌细胞细胞周期，抑制心肌再生的作用，而利用腺相关病毒抑制Let-7i表达后具有促进细胞周期进而增强心肌细胞增殖的作用，为研究治疗心肌缺血损伤的新靶点和新策略提供了理论依据和临床基础。

附图说明