[发明专利]人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白及应用

说明书

本发明涉及人的泛醌NADH脱氢酶Fe‑S蛋白2突变蛋白及应用，通过将大量肺癌、白质脑病和白血病患者作为研究病例，对病例进行基因检测并分析，确定出人的泛醌NADH脱氢酶Fe‑S蛋白2的突变蛋白，根据该人的泛醌NADH脱氢酶Fe‑S蛋白2的突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为肺癌、白质脑病和白血病的基因诊断提供指引作用，并为相关疾病的诊断和治疗提供一定的理论基础。

技术领域

本发明涉及一种基因工程领域，尤其涉及人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白及应用。

背景技术

泛醌还原型辅酶Ⅰ(Nicotinamide adenine dinucleotide，NADH)脱氢酶Fe-S蛋白2是一种位于线粒体内膜催化电子从NADH传递给辅酶Q的酶。此酶是线粒体中氧化磷酸化的“入口酶”。由NADH脱氢酶和一系列铁硫蛋白组成。它从NADH得到两个电子，经铁硫蛋白传递给辅酶Q。铁硫(Fe-S)蛋白含有非血红素铁和酸不稳定硫，其铁与肽类半胱氨酸的硫原子配位结合。铁的价态变化使电子从还原性的黄素转移到辅酶Q。

人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2发生突变会对人类健康造成影响，研究发现，在对某些疾病，包括肺癌、白质脑病和白血病患者的外周血进行基因测序的过程中，均发现患者的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2发生了突变，因此，对人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变的检测对判断人体是否患有相关疾病具有一定的指引作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白及其应用。

本发明技术方案包括：

第一方面，提供一种人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

第二方面，提供一种人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

第三方面，提供一种基因芯片，包括：固相载体和固定在该载体上的核苷酸探针；所述核苷酸探针根据所述人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白的核苷酸序列，与人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2正常蛋白的核苷酸序列的比对结果确定。

优选地，所述核苷酸探针为SEQ ID NO:3所示的碱基序列。

第四方面，提供一种特异性识别人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白的单克隆抗体，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一种用于检测人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白的抗体的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括：包被有上述单克隆抗体的ELISA酶标板、酶标二抗、检测对象的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2、样品稀释液、包被缓冲液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。

优选地，所述酶标二抗为稀释的HRP辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一种基于上述任一所述ELISA试剂盒检测人的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2突变蛋白的抗体的方法，包括：

a、使用所述包被缓冲液对上述单克隆抗体进行稀释，并将稀释后的所述单克隆抗体加样至ELISA酶标板的孔中，室温孵育；

b、使用所述样品稀释液将检测对象的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2稀释成不同浓度梯度，并将不同浓度梯度的泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白2分别加样至ELISA酶标板的孔中，室温孵育；

c、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

d、加入所述酶标二抗，并室温孵育；

e、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；