[发明专利]一种基于引物生成型滚环扩增技术的端粒酶活性检测方法在审
| 申请号： | 201810160144.1 | 申请日： | 2018-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN108359716A | 公开（公告）日： | 2018-08-03 |
| 发明（设计）人： | 张春阳;马飞;魏树花 | 申请（专利权）人： | 山东师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 王志坤 |
| 地址： | 250014 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 检测 端粒酶活性 滚环扩增 切割酶 触发 探针 成型 核酸扩增产物 反向引物 检测信号 洗涤分离 荧光染料 圆形模板 端粒酶 灵敏度 端粒 放大 | ||
1.一种探针在基于引物生成型滚环扩增技术检测端粒酶活性方法中的应用，其特征在于,所述探针序列为SEQ ID NO.1。
2.一种基于引物生成型滚环扩增技术检测端粒酶活性的方法，其特征在于,步骤如下：
(1)待测端粒酶诱导的引物生成型滚环扩增反应：DNA单链探针中加入待测端粒酶、反向引物，三磷酸脱氧核糖核苷酸、DNA聚合酶和切割酶，圆形模板，SYBR Gold，在缓冲液中孵育；
(2)分光光度计检测；
所述探针序列为SEQ ID NO.1，所述反向引物序列为SEQ ID NO.2，所述圆形模板序列为SEQ ID NO.3。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述引物序列SEQ ID NO.1 3'端为端粒酶底物序列，5'端为滚环扩增底物序列，中间包含切割酶识别位点。
4.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，DNA聚合酶为phi29 DNA聚合酶，所述切割酶为Nb.BbvCI切割酶；圆形模板含有一个Nb.BbvCI切割酶的识别位点。
5.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，缓冲液包括20mmol/LTris-HCl(pH 8.5),5mmol/L氯化镁，10mmol/L硫酸铵,20mmol/L氯化钾,1mmol/L乙二醇二乙醚二胺四乙酸，0.05％(v/v)吐温20；孵育条件为在35℃下孵育120min。
6.一种基于引物生成型滚环扩增(PG-RCA)技术检测端粒酶活性的试剂盒，包括：20nmol/L探针；20nmol/L反向引物；10nmol/L的圆形模板；1U DNA聚合酶；0.2U切割酶；0.75mmol/L三磷酸脱氧核糖核苷酸；所述探针序列为SEQ ID NO.1，所述反向引物序列为SEQ ID NO.2，所述圆形模板序列为SEQ ID NO.3。
7.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于，所述DNA聚合酶为phi29DNA聚合酶，所述切割酶为Nb.BbvCI切割酶。
8.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括：缓冲液，所述缓冲液包括20mmol/L Tris-HCl(pH 8.5)，5mmol/L氯化镁，10mmol/L硫酸铵，20mmol/L氯化钾，1mmol/L乙二醇二乙醚二胺四乙酸，0.05％(v/v)吐温20。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括1×SYBR Gold。
10.如权利要求8或9任一项所述的试剂盒在检测端粒酶活性中的应用。
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