[发明专利]一种卤代醇脱卤酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种卤代醇脱卤酶突变体，其特征在于所述卤代醇脱卤酶突变体氨基酸序列为SEQID NO.2所示。

2.一种权利要求1所述卤代醇脱卤酶突变体的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

4.一种权利要求2所述编码基因构建的重组载体。

5.一种权利要求4所述重组载体转化制备的重组基因工程菌。

6.一种权利要求1所述卤代醇脱卤酶突变体在合成阿托伐他汀关键中间体(3R,5R)6-腈基-3,5-二羟基己酸叔丁酯中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的应用以含卤代醇脱卤酶突变体编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的含湿菌体的发酵液为反应介质，以(3R,5S)6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯为底物构成pH 8.0-9.0的反应体系，在35℃进行转化反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得(3R,5R)6-腈基-3,5-二羟基己酸叔丁酯。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述湿菌体用量为10～30g/L发酵液，所述底物终浓度为50g/L发酵液。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述发酵液按如下方法制备：

(1)菌种活化：将含卤代醇脱卤酶突变体编码基因的重组基因工程菌接种到含有50μg/ml卡那霉素的种子培养基中，37℃培养至对数生长中期，获得种子液；种子培养基组成：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaHPO₄·12H₂O 8.9g/L、KH₂PO₄ 3.4g/L、NH₄Cl 2.67g/L、Na₂SO₄0.71g/L、MgSO₄·7H₂O 0.49g/L、卡那霉素50μg/L，溶剂为去离子水，pH7.0；

(2)发酵培养：将种子液按体积浓度5％的接种量接种到发酵培养基中，30℃培养6h；加入终浓度为5.0-7.0mM的α-乳糖，控制发酵温度22℃，继续发酵20h，得到所述的发酵液；所述发酵培养基质量组成：1％的蛋白胨、0.5％的酵母提取粉、54mM甘油、2.8mM葡萄糖、25mMNa₂HPO₄、25mM KH₂PO₄、50mM NH₄Cl、5mM Na₂SO₄、2mM MgSO₄、卡那霉素50μg/L，溶剂为去离子水，pH值自然。