[发明专利]联合检测多种心脏生物标志物的方法及其试剂盒

说明书

本发明提供了一种联合检测多种心脏生物标志物的试剂盒，包括融血试剂、微球试剂和荧光试剂，所述融血试剂中含有表面活性剂；所述微球试剂包括直径不同的N种微球，所述N种微球上分别对应偶联N种心脏生物标志物的第一单克隆抗体，且所述第一单克隆抗体上标记有生物素，其中，N的取值范围为2～10的正整数；所述荧光试剂包括所述N种心脏生物标志物的第二单克隆抗体，所述第二单克隆抗体上标记有荧光素，且所述第一单克隆抗体、所述第二单克隆抗体与抗原的结合位点不同。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，尤其涉及一种联合检测多种心脏生物标志物的方法及其试剂盒。

背景技术

免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、细胞或血清中的相应抗原(或抗体)的方法。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点，因此广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。目前常用的免疫荧光技术包括：放射免疫，酶联免疫，乳胶比浊，干式荧光免疫，时间分辨荧光免疫，化学发光免疫等等。化学发光免疫是目前最主流的免疫检测方法，检测原理通常为：将磁性微球作为固相材料偶联单克隆抗体(一抗)，与抗原反应后，加入酶标记的单克隆抗体(二抗)，充分反应后经洗涤、分离和纯化去除未反应的试剂。然后加入发光底物(发光显色剂)，在适当的孵育条件下，底物被酶催化显色。最后根据反应液整体发光强度判断抗原浓度，对单个项目进行定量测定。该方法检测速度快、灵敏度高，广泛应用在检验科中心实验室。但一方面，由于检测阶段须测定反应液的整体发光值，因此在抗原抗体反应阶段，需要加入过量的二抗试剂，来获得充分反应，进而在孵育之后要进行多步骤的洗涤和磁分离，来去除过量未反应的二抗试剂。这使得整个仪器结构复杂，成本变高，体机变大，检测速度变慢。另一方面，化学发光免疫仅能够使用血清作为测定样本，临床收集全血后还要进行血液分层和血清抽提，增加了临床使用的复杂程度和污染风险，无法在门急诊和基层医疗机构广泛开展。此外，采用化学发光免疫技术每次检测只能测定一个项目，无法实现多个项目的同时检测。

干式荧光免疫由于其操作方便，广泛应用。干式荧光免疫技术的方法通常为：全血或血清样本经过滤网后进入样品垫，样本中如有待测抗原，待测抗原首先在结合垫下与荧光素标记的单克隆抗体(一抗)结合，形成抗原-抗体*荧光素复合物，并靠毛细作用向测试线移动。测试线上固定有另一单克隆抗体(二抗)，当反应液层析至测试线时，可以进一步形成标记有荧光素的双抗夹心复合物，用相应波长的激光照射检测线上聚积的反应物产生荧光，从而进行定量测定。但采用干式荧光免疫检测时，由于固相液相反应本身存在更大的不确定性，而且反应物在测试线位置的堆积是有厚度的，而激光仅能把测试线表面的荧光素激发，因此干式荧光试条的批内精密度CV通常超过10％(CV＝同一个样本20次测定的标准差/平均值*100％)，即精密度不足，限制了干式荧光免疫技术的应用。此外，干式试条每个测试都要有固相载体、NC膜、干式反应需要大量的抗体，因此试剂成本远高于液相的试剂(如化学发光免疫、悬浮阵列免疫等)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种联合检测多种心脏生物标志物的方法及其试剂盒，旨在解决现有的心脏标志物的免疫检测方法，只能针对血清样本进行检测，而且检测时间长、操作复杂、价格高，且每个测试只能测定一个项目的问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明一方面提供一种联合检测多种心脏生物标志物的试剂盒，包括融血试剂、微球试剂和荧光试剂，

所述融血试剂中含有表面活性剂；

所述微球试剂包括直径不同的N种微球，所述N种微球上分别对应偶联N种心脏生物标志物的第一单克隆抗体，且所述第一单克隆抗体上标记有生物素，其中，N的取值范围为2～10的正整数；

所述荧光试剂包括所述N种心脏生物标志物的第二单克隆抗体，所述第二单克隆抗体上标记有荧光素，且所述第一单克隆抗体、所述第二单克隆抗体与抗原的结合位点不同。

以及，一种联合检测多种心脏生物标志物的方法，至少包括以下步骤：